PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol  23190-16-1  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠干擾素-r(mouse IFN-r)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  136030-00-7  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠類胰島素生長因子-1(mouse IGF-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

(1R,2R)-1-Amino-2-indanol  163061-73-2  中文名：(1R,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠肝細胞生長因子受體(HGFR/c-MET)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(+)-Noe's reagent  87248-50-8  中文名：(+)-核歐沃豪斯效應(yīng)試劑  分子式：C24H38O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(-)-Phaselic acid  423170-79-0  中文名：  分子式：C13H12O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠肝表達趨化因子(LEC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠β細胞素(BTC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Boc-3-Phenylisoserine  145514-62-1  中文名：  分子式：C14H19NO5  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠β葡萄糖酸苷酶elisa試劑盒   小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒、小鼠β葡萄糖酸苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Loperamide hydrochloride  34552-83-5  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2 

小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Boc-3-Phenylisoserine  145514-62-1  中文名：  分子式：C14H19NO5 

小鼠β葡糖苷酶elisa試劑盒   小鼠β葡糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠β葡糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β葡糖苷酶試劑盒、小鼠β葡糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Loperamide hydrochloride  34552-83-5  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bisphenol P  中文名：雙酚P  分子式：C24H26O2  度：98.0%植物類黃測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Tropisetron hydrochloride  中文名：鹽酸托烷司瓊  分子式：C17H21ClN2O2  度：98.0%

植物可溶性糖含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Pemetrexed disodium  中文名：培美曲塞二鈉  分子式：C21H23N5Na2O6 

植物激素脫落酸elisa試劑盒   植物激素脫落酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   植物激素脫落酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：植物激素脫落酸試劑盒、植物激素脫落酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Testosterone  58-22-0  中文名：睪酮  分子式：C19H28O2 

植物激素脫落酸(ABA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Tropicamide  1508-75-4  中文名：托吡卡胺  分子式：C17H20N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

植物激素脫落酸（ABA）ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Troxerutin  中文名：曲克蘆丁  分子式：C33H42O19  度：98.0%

以色列急性癱瘓病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Norethindrone  68-22-4  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗利尿激素/加壓素(mouse AVP/ADH)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Norandrostenedione  734-32-7  中文名：19-去甲-4-雄烯二酮  分子式：C18H24O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠固(mouse ALD)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

n-Octylbenzene  2189-60-8  中文名：  分子式：C14H22  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Nitrendipine  39562-70-4  中文名：尼群地平  分子式：C18H20N2O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠腺病毒（ADV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Nifuroxazide  965-52-6  中文名：硝呋酚  分子式：C12H9N3O5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠纖維蛋白肽B（FPB）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

以色列急性癱瘓病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。