PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f22-Dehydroclerosteryl acetate  28594-00-5  中文名：  分子式：C31H48O2  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  大葉桂櫻; 豆甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠琥珀酸脫氫酶elisa試劑盒   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠琥珀酸脫氫酶試劑盒、小鼠琥珀酸脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

22-Dehydroclerosterol glucoside  143815-99-0  中文名：  分子式：C35H56O6  度：%  關(guān)鍵詞：  抗肝毒; 豆甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原elisa試劑盒   大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原試劑盒、大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

22-Dehydroclerosterol  26315-07-1  中文名：22-去氫赤桐甾醇  分子式：C29H46O  度：94.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物elisa試劑盒   大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物試劑盒、大鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

21-Deoxyneridienone B  924910-83-8  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒、大鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

20-Hydroxyecdysone  5289-74-7  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗炎; 抗心律失常; 抗?jié)?/span>; 蛻皮甾; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠呼腸孤病毒3型抗體（RV-3Ab）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠表面膜球蛋白A(mIgA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Chlorogenic acid  中文名：綠原酸  分子式：C16H18O9  度：98.0%

小鼠標(biāo)志物(CA724)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Chlorotetracycline  中文名：金霉素  分子式：C22H23ClN2O8  度：98.0%

小鼠棒狀桿菌elisa試劑盒   小鼠棒狀桿菌試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠棒狀桿菌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠棒狀桿菌試劑盒、小鼠棒狀桿菌eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Cholesterol  中文名：膽固醇  分子式：C27H46O 

小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Chlorhexidine acetate  56-95-1  中文名：醋酸氯己定  分子式：C26H38Cl2N10O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠半乳糖6酯酶elisa試劑盒   小鼠半乳糖6酯酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠半乳糖6酯酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠半乳糖6酯酶試劑盒、小鼠半乳糖6酯酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Chloramphenicol  56-75-7  中文名：氯霉素  分子式：C11H12Cl2N2O5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：豬β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Terbinafine  中文名：特比萘芬  分子式：C21H25N  度：98.0%

豬α葡萄糖苷酶（α-Glu）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Terbinafine hydrochloride  中文名：鹽酸特比萘芬  分子式：C21H26ClN  度：98.0%

豬α干擾素elisa試劑盒   豬α干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬α干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬α干擾素試劑盒、豬α干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Teriflunomide  中文名：特立氟胺  分子式：C12H9F3N2O2  度：98.0%

豬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Terbinafine hydrochloride  中文名：鹽酸特比萘芬  分子式：C21H26ClN 

豬α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Terbinafine hydrochloride  78628-80-5  中文名：鹽酸特比萘芬  分子式：C21H26ClN  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

人乳頭瘤病毒33探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書Pefloxacin mesylate  70458-95-6  中文名：甲磺酸培氟沙星  分子式：C18H24FN3O6S    兔白介素6(IL-6)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethopabate  1959/6/3  中文名：乙氧酰胺苯甲酯  分子式：C12H15NO4    兔白介素17(IL-17)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Nicarbazin  330-95-0  中文名：尼卡巴嗪  分子式：C19H18N6O6    兔白介素1（IL-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ketoprofen  22071-15-4  中文名：酮基布洛芬  分子式：C16H14O3    兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝         

Phenformin hydrochloride  834-28-6  中文名：鹽酸苯乙雙胍  分子式：C10H16ClN5    兔白介素-1a(rabbit IL-1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

人乳頭瘤病毒33探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。