PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)āＭㄟ^(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷(xiāo)產(chǎn)品產(chǎn)品：

f5α-Androstane-3β,17β-diol  571-20-0  中文名：5α-雄烷二醇  分子式：C19H32O2  度：98.0%      小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-O-Ethylcleroindicin D  488138-32-5  中文名：  分子式：C10H16O4  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5'-O-Dimethoxytrityl-N-benzoyl-desoxycytidine  67219-55-0  中文名：5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N(4)-苯甲酰基-2'-脫氧胞苷  分子式：C37H35N3O7  度：98.0%      小鼠apelin12(AP12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羥甲基糠醛  分子式：C6H6O3  度：%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 山茱萸; 黃精; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗體(sNP/Sm)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Hydroxymethyl-2-furoic acid  6338-41-6  中文名：5-羥甲基-2-糠酸  分子式：C6H6O4  度：%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 對(duì)照品; 標(biāo)準(zhǔn)品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠絲酸/蘇酸蛋酸酶(STK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠高遷移率族蛋白1(HMG-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5  度：93.0%

小鼠高遷移率族蛋白(mouse HMGB1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Neochlorogenic acid  906-33-2  中文名：新綠原酸  分子式：C16H18O9 

小鼠高遷移率族蛋白   英文名稱(chēng)：   High Mobility Group Box protein 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   HMGB1  Daturataturin A  133360-51-7  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  曼陀羅屬; 曼陀羅; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

小鼠高敏狀腺原酸elisa試劑盒   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠高敏狀腺原酸試劑盒、小鼠高敏狀腺原酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Decanedioic acid  111-20-6  中文名：  分子式：C10H18O4 

小鼠高敏狀腺原酸(u-T3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5豬褪黑素（MT/MLT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sibiricose A1  中文名：6'-芥子酰基蔗糖  分子式：C23H32O15 

豬透明質(zhì)酸elisa試劑盒   豬透明質(zhì)酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬透明質(zhì)酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬透明質(zhì)酸試劑盒、豬透明質(zhì)酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Silodosin  中文名：西洛多辛  分子式：C25H32F3N3O4  度：98.0%

豬透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sibiricose A1  139726-40-2  中文名：6'-芥子酰基蔗糖  分子式：C23H32O15  度：97.0%  關(guān)鍵詞： 

豬透明質(zhì)酸(HA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Senkyunolide G  中文名：洋川芎內(nèi)酯G  分子式：C12H16O3 

豬特定基因序列(Porcine)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>)   48T  Roflumilast  162401-32-3  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

幽門(mén)螺旋桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片Przewaquinone A  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4    PlasmidMaxiKit   10T

Prosapogenin A  中文名：薯蕷次皂苷A  分子式：C39H62O12    質(zhì)粒中量提取試劑盒   50T

Propranolol hydrochloride  中文名：鹽酸普萘洛爾  分子式：C16H22ClNO2    PlasmidMidiKit   100T              

Propafenone hydrochloride  中文名：鹽酸普羅帕酮  分子式：C21H28ClNO3    質(zhì)粒大量提取試劑盒（非柱式法）   5T

Propacetamol hydrochloride  中文名：鹽酸丙帕他莫  分子式：C14H21ClN2O3    QSPlasmidMaxiKit   10T

注意事項(xiàng)：

幽門(mén)螺旋桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。