PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f6-Amino-1,3-dimethyluracil  6642-31-5  中文名：  分子式：C6H9N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

6,7-Dihydroneridienone A  72959-46-7  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  1068661-35-7  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19  度：97.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  43200-81-3  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗心肌抗體(AMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

5α-Androstanedione  846-46-8  中文名：5α-雄甾烷二酮  分子式：C19H28O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠睪elisa試劑盒   小鼠睪試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠睪試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠睪試劑盒、小鼠睪eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Decanedioic acid  中文名：  分子式：C10H18O4 

小鼠睪(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Daucosterol  474-58-8  中文名：胡蘿卜苷  分子式：C35H60O6  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 抗腫瘤; 抗癌; 豆甾烷; 甾苷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物

小鼠睪   英文名稱：   testosterone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TESTO  Daturataturin A aglycone  904665-71-0  中文名：  分子式：C28H38O5  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Erlotinib hydrochloride  183319-69-9  中文名：鹽酸埃羅替尼  分子式：C22H24ClN3O4  度：98.0%   

小鼠高遷移率族蛋白elisa試劑盒   小鼠高遷移率族蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠高遷移率族蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠高遷移率族蛋白試劑盒、小鼠高遷移率族蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Decanedioic acid  111-20-6  中文名：  分子式：C10H18O4  度：%  關(guān)鍵詞：  脂類; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫豬偽狂犬病抗體elisa試劑盒   豬偽狂犬病抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬偽狂犬病抗體試劑盒，  Shikonin  517-89-5  中文名：紫草素  分子式：C16H16O5  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 萘醌; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬偽狂犬病毒(PRV/PFV)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Sibiricose A1  中文名：6'-芥子酰基蔗糖  分子式：C23H32O15  度：97.0%

豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Sildenafil citrate  中文名：枸櫞酸西地那非  分子式：C28H38N6O11S  度：98.0%

豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測(cè)試劑盒(-PCR法)   48T  Sildenafil citrate  中文名：枸櫞酸西地那非  分子式：C28H38N6O11S 

豬褪黑素elisa試劑盒   豬褪黑素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬褪黑素試劑盒，  Shikonin  517-89-5  中文名：紫草素  分子式：C16H16O5

幼禽螺桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Qingyangshengenin 3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside  1808159-02-5  中文名：  分子式：C56H84O20  度：92.0%  關(guān)鍵詞：  孕甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠性血友病因子(mouse VWF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Qingyangshengenin  84745-94-8  中文名：青陽參苷元  分子式：C28H36O8  度：97.5%  關(guān)鍵詞：    小鼠內(nèi)皮生長因子受體-2(mouse VEGF R2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Pyrimethamine  58-14-0  中文名：乙胺嘧啶  分子式：C12H13ClN4  度：99.0%      小鼠軟骨糖蛋白39(mouse YKL-40)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Pseudoprotodioscin  102115-79-7  中文名：偽原薯蕷皂苷  分子式：C51H82O21  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  細(xì)胞毒活性; 甾苷; 天門冬屬; 薯蕷屬; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  淀粉酶 b 1-42(Amyloid b 1-42)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國 IBL  

Przewaquinone A  76843-23-7  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠性血友病因子   英文名稱：   von Willebrand Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VWF

注意事項(xiàng)：

幼禽螺桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。