PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fCatalpalactone  1585-68-8  中文名：  分子式：C15H14O4  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Carvedilol  72956-09-3  中文名：卡維地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Cardenolide B-1  1318158-89-2  中文名：  分子式：C30H44O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠尿蛋白（UP）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林鈣  分子式：C19H18CaN2O9  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體   英文名稱：   urokinase-plasmingen activator receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   uPA-R

Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他濱  分子式：C16H20FN3O7  度：98.0%      小鼠超敏感度促甲狀腺素   英文名稱：   Mouse ulasensitive Thyroid Stimulating Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   U.TSH

小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Donepezil hydrochloride  中文名：鹽酸多奈哌齊  分子式：C24H30ClNO3  度：98.0%

小鼠甲狀旁腺激素   英文名稱：   Mouse Parathormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PTH  N-Acetyl-L-tryptophan  1218-34-4  中文名：N-乙酰-L-色氨酸  分子式：C13H14N2O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠甲種胎兒球蛋白elisa試劑盒   小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒、小鼠甲種胎兒球蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Diaveridine  5355-16-8  中文名：敵菌凈  分子式：C13H16N4O2 

小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Donepezil hydrochloride  中文名：鹽酸多奈哌齊  分子式：C24H30ClNO3 

小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  L-Aspartic acid  56-84-8  中文名：L-天門冬氨酸  分子式：C4H7NO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞組織KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定量PCR擴增檢測試劑盒20次  1-Benzyl L-aspartate  7362-93-8  中文名：L-天冬氨酸1-芐酯  分子式：C11H13NO4  度：98.0%   

組織JNK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Benzyl-1H-indazol-3-ol  中文名：1-芐基-1H-吲唑-3-醇  分子式：C14H12N2O  度：98.0%

組織JNK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Benzylimidazole  4238-71-5  中文名：1-芐基咪唑  分子式：C10H10N2  度：98.0%   

組織JNK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Chloro-6-(5-(prop-1-ynyl)thiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C13H9ClOS  度：97.0%

組織JAK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate  99464-83-2  中文名：  分子式：C9H15ClO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Rosiglitazone maleate  中文名：馬來酸羅格列酮  分子式：C22H23N3O7S  度：98.0%  豚鼠壞死因子αelisa試劑盒   豚鼠壞死因子α試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠壞死因子α試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠壞死因子α試劑盒、豚鼠壞死因子αeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Diclofenac sodium  中文名：雙氯芬酸鈉  分子式：C14H10Cl2NNaO2  度：98.0%  豚鼠elisa試劑盒   豚鼠試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠試劑盒、豚鼠eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Finasteride  中文名：非那雄胺  分子式：C23H36N2O2  度：98.0%  豚鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-(2-Methyl-5-nitrophenyl)-4- (pyridin-3-yl)pyrimidin-2-amine  中文名：  分子式：C16H13N5O2  度：98.0%  豚鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Tebipenem pivoxil  中文名：泰比培南酯  分子式：C22H31N3O6S2  度：98.0%  豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

鐮刀菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。