PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fCefixime  79350-37-1  中文名：頭孢克肟  分子式：C16H15N5O7S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝血酶敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TSP-1

Cefcapene pivoxil hydrochloride  147816-24-8  中文名：鹽酸頭孢卡品酯  分子式：C23H32ClN5O9S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白   英文名稱：   thrombomodulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TM

Caudatin  38395-02-7  中文名：告達(dá)庭  分子式：C28H42O7  度：98.5%  關(guān)鍵詞：    小鼠TH糖蛋白   英文名稱：   Mouse Tamm Horsfall Protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   THP

Catalponol methylthiomethyl ether  1432057-74-3  中文名：  分子式：C17H22O2S  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  四氫萘酮; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠抗酸性0酸酶5   英文名稱：   Mouse Tarate Resista Acid Phosphatase 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AP 5

Catalponol  34168-56-4  中文名：  分子式：C15H18O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  梓; 四氫萘酮; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠尿微量白蛋白（ALB）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠甲狀腺過氧化物酶elisa試劑盒   小鼠甲狀腺過氧化物酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠甲狀腺過氧化物酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠甲狀腺過氧化物酶試劑盒、小鼠甲狀腺過氧化物酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Doxifluridine  3094/9/5  中文名：  分子式：C9H11FN2O5 

小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Doxycycline  564-25-0  中文名：多西環(huán)素  分子式：C22H24N2O8 

小鼠甲狀腺過氧化物酶(TPO)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Doxapram hydrochloride monohydrate  中文名：鹽酸多沙普侖  分子式：C24H33ClN2O3  度：98.0%

小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白elisa試劑盒   小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白試劑盒、小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Dorzolomide hydrochloride  中文名：鹽酸多佐胺  分子式：C10H17ClN2O4S3  度：98.0%

小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Deflazacort  14484-47-0  中文名：地夫可特  分子式：C25H31NO6組織L-乳酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20次  19-Nortestosterone acetate  中文名：19-去甲睪酮乙酸鹽  分子式：C20H28O3  度：98.0%

組織LYNB激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次  1-Acetoxy-9,17-octadecadiene-12,14-diyne-11,16-diol  213905-35-2  中文名：  分子式：C20H28O4  度：%  關(guān)鍵詞：  聚乙炔; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

組織LYNA激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次  1-Actamido-3,5-dimethyladmantane  中文名：  分子式：C14H23NO  度：98.0%

組織LCK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次  1-Amino-2-methylanthraquinone  82-28-0  中文名：1-氨基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H11NO2  度：98.0%   

組織KSHV(KAPOSISARCOMA-ASSOCIATEDHERPESVIRUS)病毒定性檢測(cè)試劑盒20次  1-Amino-4-hydroxyanthraquinone  中文名：1-氨基-4-羥基蒽醌  分子式：C14H9NO3  度：98.0%

擬枝孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書rsodeoxycholic acid  中文名：熊去氧膽酸  分子式：C24H40O4  度：98.0%  兔銅藍(lán)蛋白(CP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Deoxycholic acid  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4  度：98.5%  兔細(xì)胞間粘附分子-1 (rabbit ICAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Timosaponin AIII  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13  度：98.5%  兔干擾素-a(rabbit IFN-a)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Diosgenin  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  兔干擾素-β(rabbit IFN-β)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Sarsasapogenin  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3  度：99.0%  兔干擾素-r(rabbit IFN-r)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

擬枝孢鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。