PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

串珠鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒廠家簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fClemastine fumarate  14976-57-9  中文名：富馬酸氯馬斯汀  分子式：C25H30ClNO5  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝血因子elisa試劑盒   小鼠凝血因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠凝血因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠凝血因子試劑盒、小鼠凝血因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Citrostadienol  474-40-8  中文名：檸檬二烯醇  分子式：C30H50O  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Citreorosein  481-73-2  中文名：ω-羥基大黃素  分子式：C15H10O6  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  cAMP磷酸二酯酶抑制劑; ; 大黃屬; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

cis-Octahydro-isoindole  21850-12-4  中文名：  分子式：C8H15N  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠牛小腸堿性0酸酶(CIAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ciprofloxacin hydrochloride  93107-08-5  中文名：鹽酸環(huán)丙沙星  分子式：C17H19ClFN3O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠降鈣素原(PCT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Carbasalate calcium  5749-67-7  中文名：卡巴匹林鈣  分子式：C19H18CaN2O9 

小鼠降鈣素原   英文名稱：   Mouse procalcitonin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PCT  Coumarin 6  38215-36-0  中文名：香豆素 6  分子式：C20H18N2O2S 

小鼠降鈣素受體(C)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dregeoside Aa1  20230-41-5  中文名：  分子式：C49H78O17  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  南山藤; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Dregeoside Aa1  20230-41-5  中文名：  分子式：C49H78O17 

小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Flumequine sodium  42835-68-7  中文名：氟甲喹鈉  分子式：C14H11FNNaO3  度：98.0%組織PAK4激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1,2-Bis(phenylthio)ethane  622-20-8  中文名：1,2-雙(苯硫基)乙烷  分子式：C14H14S2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

組織PAK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1,2-Cyclohexanedicarboximide  中文名：  分子式：O2  度：98.0%

組織PAK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1,3-Bis(4,5-dihydro-2-oxazolyl)benzene  34052-90-9  中文名：1,3-雙(4,5-二氫-2-惡唑)苯  分子式：C12H12N2O2  度：98.0%   

組織P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1,4-Bis(5-phenyl-2-oxazolyl)benzene  中文名：1,4-雙(5-苯基-2-惡唑基)苯  分子式：C24H16N2O2  度：98.0%

組織P38a激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次  1,5,15-Tri-O-methylmorindol  942609-65-6  中文名：  分子式：C18H16O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  海巴戟; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

串珠鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒廠家S-2-Benzothiazolyl2-amino-alpha-(methoxyimino)-4-thiazolethiolacetate  中文名：AE活性酯  分子式：C13H10N4O2S3  度：98.0%  小鼠白介素 -13(p70) (mouse IL-13)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 Biosource  

Azathioprine  中文名：硫唑嘌呤  分子式：C9H7N7O2S  度：98.0%  小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   小鼠癌胚抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠癌胚抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠癌胚抗原試劑盒、小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

2-Benzothiazolol  中文名：2-羥基苯并噻唑  分子式：C7H5NOS  度：98.0%  超氧化物歧化酶測elisa試劑盒   超氧化物歧化酶測試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   超氧化物歧化酶測試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：超氧化物歧化酶測試劑盒、超氧化物歧化酶測elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

1,2-Benzanthraquinone  中文名：1,2-苯并奎寧酮  分子式：C18H10O2  度：98.0%  鹿紅細(xì)胞膜蛋白elisa試劑盒   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒、鹿紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

9-Anthracenecarboxylic acid  中文名：9-蒽甲酸  分子式：C15H10O2  度：98.0%  小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   小鼠16α羥基雌試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠16α羥基雌試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠16α羥基雌試劑盒、小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。