PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

fDiosgenin  512-04-9  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3  度：98.0%  關鍵詞：  抗炎; 雌激素劑; 黃山藥; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠17羥孕(17-OHP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Dioscin  19057-60-4  中文名：薯蕷皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  關鍵詞：  溶血; 細胞毒; 抗真菌; 薯蕷屬; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠乳酸脫氫酶   英文名稱：   Mouse Lactate Dehydrogenase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LDH

Dinitolmide  148-01-6  中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5  度：98.0%      小鼠白三烯C4   英文名稱：   Mouse Leukoiene C4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LTC4

Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%      小鼠脂蛋白酯酶   英文名稱：   Mouse Lipopeinlipase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LPL

Dimethylolurea  140-95-4  中文名：雙羥甲脲  分子式：C3H8N2O3  度：98.0%      小鼠白三烯   英文名稱：   Mouse leukoiene   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LT3

小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Nandrolone undecylate  862-89-5  中文名：十一酸諾龍  分子式：C29H46O3  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Epirengynic acid  中文名：  分子式：C8H14O4  度：98.0%

小鼠抗單核細胞抗體elisa試劑盒   小鼠抗單核細胞抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗單核細胞抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠抗單核細胞抗體試劑盒、小鼠抗單核細胞抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Epigoitrin  中文名：表告依春  分子式：C5H7NOS  度：98.5%

小鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Epiandrosterone  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2  度：98.0%

小鼠抗單核細胞抗體(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Estradiol  50-28-2  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2Stigmasterol glucoside  19716-26-8  中文名：  分子式：C35H58O6    組織PKC激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

Stigmastane-3,6-diol  112244-29-8  中文名：  分子式：C29H52O2    HumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit人腮腺炎病毒IgGELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

17α-Thevebioside  114613-59-1  中文名：  分子式：C36H56O13    兔子基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2    Human thymosin alpha 1 (Thymosin alpha 1) ELISA Kit 人胸腺肽α1(Thymosin α1)ELISA試劑盒

α-Spinasterol glucoside  1745-36-4  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6    Human28SribosomeRNPaibody,28SrRNPELISAKit 人28S抗核糖體抗體(28SrRNP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

博茲曼熒光桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Sibiricose A1  139726-40-2  中文名：6'-芥子酰基蔗糖  分子式：C23H32O15    HumanDehydroepiandrosterone,DHEAELISA試劑盒人脫氫表雄同(DHEA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate  123435-84-7  中文名：  分子式：C20H34O3    組織JNK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

(-)-Phaselic acid  423170-79-0  中文名：  分子式：C13H12O8    HumanplasmaaicoagulaproteinC,PCELISAKit人血漿抗凝蛋白C(PC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Ethyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  947529-92-2  中文名：  分子式：C20H36O3    兔子纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  1068661-35-7  中文名：6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式：C34H42O19    Rat heme oxygenase 1 (HO-1) ELISA Kit 大鼠血紅素氧合酶1(HO-1)ELISA試劑盒

注意事項：

博茲曼熒光桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。