PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fEcdysterone 20,22-monoacetonide  22798-96-5  中文名：  分子式：C30H48O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  蛻皮甾; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠上腺素能a1A受體elisa試劑盒   小鼠上腺素能a1A受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠上腺素能a1A受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠上腺素能a1A受體試劑盒、小鼠上腺素能a1A受體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Dyphylline  479-18-5  中文名：二羥丙茶堿  分子式：C10H14N4O4  度：98.0%      小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子elisa試劑盒   小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒、小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Duloxetine hydrochloride  136434-34-9  中文名：鹽酸度洛西汀  分子式：C18H20ClNOS  度：98.0%      小鼠上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

D-Tryptophan methyl ester hydrochloride  14907-27-8  中文名：  分子式：C12H15ClN2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Drospirenone  67392-87-4  中文名：屈螺酮  分子式：C24H30O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠上腺素(E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Ergosterol glucoside  130155-33-8  中文名：麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6 

小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Benzoyleneurea  中文名：亞苯甲?；?/span>  分子式：C8H6N2O2 

小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Fenofibric acid  中文名：非諾貝特酸  分子式：C17H15ClO4 

小鼠抗內(nèi)膜抗體elisa試劑盒   小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗內(nèi)膜抗體試劑盒、小鼠抗內(nèi)膜抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Ethyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  161797-99-5  中文名：  分子式：C13H13NO3S 

小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ergosta-7,22-dien-3-one  中文名：麥角甾-7,22-二烯-3-酮  分子式：C28H44O  度：95.0%Uzarigenin  466-09-1  中文名：  分子式：C23H34O4    Humanenkephalin,ENKELISA試劑盒人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Odoroside H  18810-25-8  中文名：  分子式：C30H46O8    組織PKCζ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Neridienone B  61671-56-5  中文名：  分子式：C21H28O4    HumanParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit人甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Neritaloside  465-13-4  中文名：  分子式：C32H48O10    兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Ophiopogonin D  945619-74-9  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16    Human thymus activation regulated chemokine (TAFA/CCL17) ELISA Kit 人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)ELISA試劑盒

貓免疫缺陷病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸Sitostenone  1058-61-3  中文名：豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  蘇里南苦木; 火炬松; 豆甾烷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Sitagliptin phosphate  654671-78-0  中文名：無(wú)水磷酸西他列汀  分子式：C16H18F6N5O5P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠牙本質(zhì)涎0蛋白   英文名稱：   Mouse Dein Sialophosphoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DSP

Sitafloxacin  127254-12-0  中文名：西他沙星  分子式：C19H18ClF2N3O3  度：98.5%      小鼠DNA抗體   英文名稱：   Mouse Deoxyribonucleic Acid Aibody   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DNA.Ab

Silodosin  160970-54-7  中文名：西洛多辛  分子式：C25H32F3N3O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠氧化酶   英文名稱：   Mouse Diamine Oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DAO

Sildenafil citrate  171599-83-0  中文名：枸櫞酸西地那非  分子式：C28H38N6O11S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠多巴胺受體D1   英文名稱：   Mouse Dopamine receptor D1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   DRD1

注意事項(xiàng)：

貓免疫缺陷病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。