PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fMethyl 4-O-feruloylquinate  195723-10-5  中文名：  分子式：C18H22O9  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  莽草酸; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠維生素D(VD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Methyl 4'-methylbiphenyl-2-carboxylate  114772-34-8  中文名：  分子式：C15H14O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Methyl 4'-bromomethyl biphenyl-2-carboxylate  114772-38-2  中文名：  分子式：C15H13BrO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠維生素B6(VB6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Methyl 3-cyclopropyl-3-oxopropionate  32249-35-7  中文名：  分子式：C7H10O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Fudosteine  13189-98-5  中文名：福多斯坦  分子式：C6H13NO3S 

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Glaucogenin C mono-D-thevetoside  849201-84-9  中文名：  分子式：C28H40O9 

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(mouse TAT)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Methenolone enanthate  中文名：美替諾龍庚酸酯  分子式：C27H42O3 

小鼠凝血酶抗凝血酶復(fù)合物   英文名稱：   Thrombin-aithrombin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TAT  Daturataturin A  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%

小鼠凝溶膠蛋白elisa試劑盒   小鼠凝溶膠蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠凝溶膠蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠凝溶膠蛋白試劑盒、小鼠凝溶膠蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Mannitol  69-65-8  中文名：甘露醇  分子式：C6H14O69,16-Dioxo-10,12,14-octadecatrienoic acid  217810-46-3  中文名：  分子式：C18H26O4    Rat thrombus precursor protein (TpP) ELISA Kit 大鼠血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒

11-Hydroxyjasmonic acid  140447-14-9  中文名：  分子式：C12H18O4    Humanai-glycoproteinaibody,GPELISAKit 人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Soyacerebroside II  115074-93-6  中文名：大豆腦苷II  分子式：C40H75NO9    humandihydropyrimidinase-like3,DPYSL3ELISA試劑盒人二氫嘧啶酶樣3(DPYSL3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Sucrose  57-50-1  中文名：  分子式：C12H22O11    組織MUSK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羥甲基糠醛  分子式：C6H6O3    Humanphospholamban,PLNELISAKit人受0蛋白(PLN)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

雞附紅細胞體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Tenacigenoside A  中文名：  分子式：C35H56O12  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5  度：93.0%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one  中文名：  分子式：C29H46O2  度：%  兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Oleandrin  中文名：  分子式：C32H48O9  度：98.0%  兔內(nèi)皮素（Endothelin-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

β-Anhydrouzarigenin  中文名：  分子式：C23H32O3  度：97.0%  兔內(nèi)皮抑素(rabbit ES)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

注意事項：

雞附紅細胞體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。