PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷(xiāo)產(chǎn)品產(chǎn)品：

fPonasterone A  13408-56-5  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  臺(tái)灣羅漢松; 蛻皮甾; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Polypodine B 20,22-acetonide  159858-85-2  中文名：20,22-異丙叉基水龍骨甾酮B  分子式：C30H48O8  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  蛻化類(lèi)固醇; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Polypodine B  18069-14-2  中文名：水龍骨甾酮B  分子式：C27H44O8  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  昆蟲(chóng)蛻皮激素活性; 歐亞水龍骨; 蛻化類(lèi)固醇; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Polyphyllin D  50773-41-6  中文名：重樓皂苷D  分子式：C44H70O16  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Polyhydroxybutyrate  26744-04-7  中文名：聚羥基丁酸酯  分子式：C12H20O7  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(mouse VEGF-B)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子elisa試劑盒   小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子試劑盒、小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Hydroxyprogesterone acetate  302-23-8  中文名：醋酸羥孕酮  分子式：C23H32O4 

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Hydroxyprogesterone  68-96-2  中文名：羥孕酮  分子式：C21H30O3 

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Indapamide  中文名：吲達(dá)帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S 

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Indapamide  中文名：吲達(dá)帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S  度：98.0%

小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素4(mouse -4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Imidazo[1,2-b]pyridazine  中文名：  分子式：C6H5N3  度：98.0%N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  NO  中文名：  分子式：C16H21N3O4S    Human plasminogen / plasmin (PL/Fbn) ELISA Kit 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒

Ribavirin  36791-04-5  中文名：利巴韋林  分子式：C8H12N4O5    HumanExactablenucleraigen,ENAELISAKit 人可提取核抗原(ENA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Norfloxacin lactate  97867-34-0  中文名：乳酸諾氟沙星  分子式：C19H24FN3O6    HumancytotoxicTlymphocyteassociatedaigen4,CTLA-4ELISA試劑盒人細(xì)胞毒性T細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7-Methoxy-1-tetralinone  6836-19-7  中文名：  分子式：C11H12O2    組織II型L-3羥?；?/span>-CoA脫氫酶/β淀粉樣蛋白結(jié)合乙醇脫氫酶(HADHII/ABAD)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Silodosin  160970-54-7  中文名：西洛多辛  分子式：C25H32F3N3O4    HumanPlasminogen，PlgELISAKit人纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

嚙蝕艾肯菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)Tranexamic acid  1197-18-8  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2    鐵測(cè)試盒   Iron test case

2-Aminonicotinic acid  5345-47-1  中文名：2-氨基煙酸  分子式：C6H6N2O2    錳測(cè)試盒   Manganese test case

6'-Amino-3',4'-(methylenedioxy)acetophenone  28657-75-2  中文名：6'-氨基-3',4'-(亞甲基二氧代)苯乙酮  分子式：C9H9NO3    鎳測(cè)試盒   Nickel test case

2-Amino-3-methylbenzoic acid  4389-45-1  中文名：2-氨基-3-甲基苯甲酸  分子式：C8H9NO2    鹽快速測(cè)試盒   Niate rapid test case              

5-Aminouracil  932-52-5  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2    調(diào)節(jié)活化蛋白   英文名稱(chēng)：   Human Raes   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   RAES

注意事項(xiàng)：

嚙蝕艾肯菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。