服務流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：刺激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒運輸

英文名稱：Cryptocaryon irritans

貨號: GOY-M3885

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

β(1S)-4,5-Dimethoxy-1-[(methylamino)methyl]benzocyclobutane hydrochloride  中文名：  分子式：C12H18ClNO2    小鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol  中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇  分子式：C14H15NO    小鼠主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

(1R,2S)-1-Amino-2-indanol  中文名：(1R,2S)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    小鼠轉化生長因子-β1   英文名稱：   Ttansforming Growth Factor -β1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TGF-β1

(1R,2R)-1-Amino-2-indanol  中文名：(1R,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    小鼠轉化生長因子-β2   英文名稱：   Ttansforming Growth Factor -β2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TGF-β2

(+)-Noe's reagent  中文名：(+)-核歐沃豪斯效應試劑  分子式：C24H38O3    小鼠基質金屬蛋白酶抑制劑-1   英文名稱：   Tissue inhibitors of metalloproteinases 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TIMP-1

小鼠活性腸肽(VIP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Methyl 2,2-dithienylglycolate  26447-85-8  中文名：  分子式：C11H10O3S2 

小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶elisa試劑盒   小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶試劑盒、小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Betamethasone  中文名：倍他米松  分子式：C22H29FO5  度：98.0%

小鼠溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Methyl (3R)-3-(tert-butyldimethylsilyloxy)-5-oxo-6-triphenylphosphoranylidenehexanoate  中文名：  分子式：C31H39O4PSi  度：98.0%

小鼠嗅素4   英文名稱：   Mouse Olfactomedin 4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OLFM4  Imatinib mesylate  220127-57-1  中文名：伊馬替尼  分子式：C30H35N7O4S 

小鼠雄烯二elisa試劑盒   小鼠雄烯二試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠雄烯二試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠雄烯二試劑盒、小鼠雄烯二eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。     Bis[4-(dimethylamino)phenyl]methane  中文名：雙[4-(二甲氨基)苯基]甲烷  分子式：C17H22N2

Pramipexole dihydrochloride  104632-25-9  中文名：鹽酸普拉克索  分子式：C10H19Cl2N3S    CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β內(nèi)啡肽規(guī)格：48T/96T

N-6-Methyl-7,7-dioxo-2-sulfamoyl-5,6-dihydro-4H-thieno[2,3-b]thiopyran-4-yl]acetamide  147200-03-1  中文名：  分子式：C10H14N2O5S3    細菌樣品二維電泳裂解液用于細菌蛋白二維電泳

1,5-Pentanediol diacrylate  36840-85-4  中文名：  分子式：C11H16O4    RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Atracurium oxalate  64228-78-0  中文名：阿曲庫胺草酸鹽  分子式：C53H68N2O16    豚鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-2 ELISA Kit

Lurasidone  367514-87-2  中文名：魯拉西酮  分子式：C28H36N4O2S    Human ubiquitin decomposition enzyme (DUB) ELISA Kit 人泛素分解酶(DUB)ELISA試劑盒

刺激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒運輸促紅細胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國 DRG     3-tert-Butoxycarbony-2-(4-anisyl)-4-phenyl-5-oxazolidinecarboxylic acid  中文名：  分子式：C22H25NO6 

促紅細胞生成素 (EPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  3090-70-8  中文名：3-乙?；?/span>-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3 

雌三醇 (E3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Nicorandil  65141-46-0  中文名：尼可地爾  分子式：C8H9N3O4 

醇脫氫酶（ADH）試劑盒   紫外分光光度法    50管/48樣  Vilazodone hydrochloride  中文名：鹽酸維拉唑酮  分子式：C26H28ClN5O2 

傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Sitostenone  中文名：豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O

使用方法：

刺激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒運輸一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）