PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f(R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone  中文名：(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮  分子式：C10H11NO2    小鼠總膽固醇   英文名稱：   Mouse Total Cholesterol   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TC

(R)-(+)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol  中文名：(R)-(+)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇  分子式：C17H21NO    小鼠壞死因子   英文名稱：   Mouse Total Tumor Necrosis Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNF

(R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  中文名：(R)-(+)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚  分子式：C20H14O2    小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   英文名稱：   Mouse ansferrin Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TFR

(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙?；?/span>-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3    小鼠轉(zhuǎn)移趨化生長因子β   英文名稱：   Mouse ansforming Growth Factor β   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TGFβ

(2Z,6Z,10E,14E,18E)-Farnesylfarnesol  中文名：  分子式：C30H50O    小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2(mouse TGF-β2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠緊張素原(aGT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Convallagenin B  中文名：鈴蘭皂苷元B  分子式：C27H44O6 

小鼠緊張素II(mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester  3483-82-7  中文名：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯  分子式：C18H19NO4 

小鼠緊張素elisa試劑盒   小鼠緊張素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠緊張素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠緊張素試劑盒、小鼠緊張素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Methyl 2-ethoxybenzimidazole-7-carboxylate  150058-27-8  中文名：  分子式：C11H12N2O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Methyl 2,2-dithienylglycolate  中文名：  分子式：C11H10O3S2 

小鼠緊張素Ⅱ   英文名稱：   Angiotensin Ⅱ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANGⅡ  Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4  度：98.0%

Imatinib  152459-95-5  中文名：伊馬替尼  分子式：C29H31N7O    人內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3    豚鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

9-Aminominocycline hydrochloride  149934-21-4  中文名：  分子式：C23H29ClN4O7    Human cytochrome P450c21A/21- hydroxylase (CYP21A) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒

Minocycline hydrochloride  13614-98-7  中文名：  分子式：C23H28ClN3O7    HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Benzyl 2-aminoacetate p-toluenesulfonate  1738-76-7  中文名：  分子式：C16H19NO5S    HumancyclophilinB,CyPBELISA試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

克羅諾桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書大鼠Active Caspase-7   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2 

大鼠Active Caspase-3   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tolvaptan  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3 

大鼠 C 反應(yīng)蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI     Methyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  109837-85-6  中文名：  分子式：C19H34O3 

大量DNA產(chǎn)物化試劑盒   A lot of DNA product purification kit  Axitinib  中文名：阿西替尼  分子式：C22H18N4OS  度：98.0%

注意事項(xiàng)：

克羅諾桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。