PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f2,2'-Anhydro-5-methyluridine  中文名：2,2'-O-脫水-5-甲基尿嘧啶核苷  分子式：C10H12N2O5    溴紫   5g

2-(Phenylmethoxy)-naphthalene  中文名：2-萘酚芐基醚  分子式：C17H14O    BromocresolPurple,FreeAcid   25g

2-(Morpholinodithio)benzothiazole  中文名：2-(4-嗎啉基二硫代)苯并噻唑  分子式：C11H12N2OS3    溴酚蘭   10g

2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  中文名：  分子式：C10H9ClN2    BromophenolBlue   50g              

2-(7-Methoxy-1-naphthyl)ethylamine hydrochloride  中文名：  分子式：C13H16ClNO    溴化乙錠   1g

小鼠血小板衍化生長因子 -B(mouse PDGF-AB)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D     Ilaprazole  172152-36-2  中文名：艾普拉唑  分子式：C19H18N4O2S 

小鼠血小板衍化生長因子 (mouse PDGF-AA)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D  Ilaprazole  172152-36-2  中文名：艾普拉唑  分子式：C19H18N4O2S  度：98.0%   

小鼠血小板相關(guān)抗體IgG(mouse PAIgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Dehydroadynerigenin digitaloside  52628-62-3  中文名：  分子式：C30H42O8 

小鼠血小板相關(guān)抗體IgG   英文名稱：   platelet-associated aibody IgG   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PAIgG  m-Nitrohydrocinnamic acid  中文名：  分子式：C9H9NO4  度：98.0%

小鼠血小板生長因子受體α(mouse PDGF sRα)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Mefenamic acid  61-68-7  中文名：甲滅酸  分子式：C15H15NO2

17-Hydroxy-1a,2a-methylenepregna-4,6-diene-3,20-dione acetate  2701-50-0  中文名：  分子式：C24H30O4    人生長因子elisa試劑盒   人生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人生長因子試劑盒、人生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

4-(Phenylthio)benzyl alcohol  6317-56-2  中文名：  分子式：C13H12OS    人重肽鐵蛋白(FTH)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human FTH (Ferritin, Heavy Polypeptide) ELISA Kit

Fenticonazole nitrate  73151-29-8  中文名：硝酸芬替康唑  分子式：C24H21Cl2N3O4S    人Pirin蛋白(PIR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human PIR (Pirin) ELISA Kit

2-Fluoroadenosine  146-78-1  中文名：  分子式：C10H12FN5O4    人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit

ER-878898  122111-11-9  中文名：  分子式：C20H18F2O8S    人突觸足蛋白(SYNPO)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human SYNPO (Synaptopodin) ELISA Kit

嗜人錐蠅探針法熒光定量PCR試劑盒說明書干細胞因子受體 (SCF R)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Paris Saponin VII  68124-04-9  中文名：重樓皂苷VII  分子式：C51H82O21 

干細胞因子受體   英文名稱：   stem cell factor receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SCF R  Parecoxib sodium  198470-85-8  中文名：帕瑞考昔鈉  分子式：C19H17N2NaO4S 

干細胞因子 (SCF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Paris Saponin VII  68124-04-9  中文名：重樓皂苷VII  分子式：C51H82O21  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

干細胞因子   英文名稱：   stem cell factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SCF  Parecoxib sodium  198470-85-8  中文名：帕瑞考昔鈉  分子式：C19H17N2NaO4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

干擾素α受體   英文名稱：   Human Ierferon α Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IFNαR  Pramipexole dihydrochloride  104632-25-9  中文名：鹽酸普拉克索  分子式：C10H19Cl2N3S

注意事項：

嗜人錐蠅探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。