實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：生孢梭菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸

英文名稱：Clostridium sporogenes

貨號: GOY-M3857

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式：C13H9ClN2O3    內皮生長因子D   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor D   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-D

2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone  中文名：2-氨基-2',5-二氯二苯酮  分子式：C13H9Cl2NO    內皮生長因子165   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor 165   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF165

2-Allylphenol  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O    內皮生長因子 D(VEGF-D)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

2-Acetylfluorene  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O    內皮生長因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

2-Acetylbutyrolactone  中文名：2-乙酰基丁內酯  分子式：C6H8O3    內皮生長因子受體 1(VEGF-R1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白(KLH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Hypocrellin A  77029-83-5  中文名：竹紅菌甲素  分子式：C30H26O10 

小鼠氧化型谷胱甘肽elisa試劑盒   小鼠氧化型谷胱甘肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠氧化型谷胱甘肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠氧化型谷胱甘肽試劑盒、小鼠氧化型谷胱甘肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  N-(2-Hydroxyethyl)-3-(4-nitrophenyl)propylamine  中文名：  分子式：C11H16N2O3  度：98.0%

小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2,6-Dimethylphenyl)-2-piperidinecarboxamide  中文名：  分子式：C14H20N2O  度：98.0%

小鼠氧化型高密度脂蛋白(ox-HDL）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide  中文名：  分子式：C11H9NO3  度：98.0%

小鼠氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N-(2,3-Epoxypropyl)phthalimide  中文名：  分子式：C11H9NO3

Eplerenone  107724-20-9  中文名：依普利酮  分子式：C24H30O6    人主要組織相容性復合體Ⅰ類elisa試劑盒   人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒、人主要組織相容性復合體Ⅰ類 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Flumethasone  2135-17-3  中文名：氟米松  分子式：C22H28F2O5    人軸突生長誘向因子4elisa試劑盒   人軸突生長誘向因子4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人軸突生長誘向因子4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人軸突生長誘向因子4試劑盒、人軸突生長誘向因子4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  103335-55-3  中文名：  分子式：C19H29NO3    人軸突生長誘向因子1elisa試劑盒   人軸突生長誘向因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人軸突生長誘向因子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人軸突生長誘向因子1試劑盒、人軸突生長誘向因子1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

3-(4-Chlorobutyl)indole-5-carbonitrile  143612-79-7  中文名：  分子式：C13H13ClN2    人周期素依賴性激酶9(CDK-9)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human CDK9 (Cyclin Depende Kinase 9) ELISA Kit

5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide  183288-46-2  中文名：  分子式：C13H15N3O2    人周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human CDKN2A (Cyclin Depende Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit

生孢梭菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸瓜酸   ELISA.   96T/48T              Emodin  518-82-1  中文名：大黃素  分子式：C15H10O5 

固（ALD）   96T/48T  Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3 

固   英文名稱：   Aldosterone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Aldosterone  4-(4-(5-(Aminomethyl)-2-oxooxazolidin-3-yl)phenyl)morpholin-3-one  446292-10-0  中文名：  分子式：C14H17N3O4 

骨橋素/骨橋蛋白   英文名稱：   Osteopoin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OPN  Methyl β-D-fructofuranoside  13403-14-0  中文名：甲基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C7H14O6 

骨橋蛋白 ( Osteopoin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國 IBL  3-Methyl-1-(2-piperidinophenyl)butylamine N-acetylglutamate salt  219921-94-5  中文名：  分子式：C23H37N3O5

服務流程：

生孢梭菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1、根據客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）