PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f2-Aminofluorene  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N    載脂蛋白 E(APO E)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Amino-9H-fluoren-9-one  中文名：2-氨基-9H-芴-9-酮  分子式：C13H9NO    抗利尿激素 (AVP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

2-Amino-6-methylbenzothiazole  中文名：2-氨基-6-甲基苯并噻唑  分子式：C8H8N2S    內(nèi)皮抑素 (Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Amino-6-ethoxybenzothiazole  中文名：2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑  分子式：C9H10N2OS    內(nèi)皮素 -1(Endothelin-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Amino-6-chloropurine  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5    內(nèi)啡肽 - b (Endorphin- b )   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           N-[2-Isopropylthiazol-4-ylmethyl(methyl)carbamoyl]-L-valine  154212-61-0  中文名：  分子式：C14H23N3O3S 

小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine  中文名：N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒  分子式：C14H22N4O4  度：98.0%

小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine  中文名：N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒  分子式：C14H22N4O4 

小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Estra-4,9-diene-3,17-dione  5173-46-6  中文名：甲基雙烯雙酮  分子式：C18H22O2 

小鼠胰島素樣生長因子elisa試劑盒   小鼠胰島素樣生長因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠胰島素樣生長因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰島素樣生長因子試劑盒、小鼠胰島素樣生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Monobenzone  103-16-2  中文名：莫諾苯宗  分子式：C13H12O2

Nandrolone decanoate  360-70-3  中文名：癸酸諾龍  分子式：C28H44O3    人轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit

Testosterone acetate  1045-69-8  中文名：醋酸睪酮  分子式：C21H30O3    人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit

Testosterone isocaproate  15262-86-9  中文名：異己酸睪酮  分子式：C25H38O3    人腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit               

Testosterone decanoate  5721-91-5  中文名：癸酸睪酮  分子式：C29H46O3    人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白elisa試劑盒   人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白試劑盒、人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Dehydroepiandrosterone acetate  853-23-6  中文名：醋酸去氫表雄酮  分子式：C21H30O3    人轉(zhuǎn)化生長因子β2elisa試劑盒   人轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人轉(zhuǎn)化生長因子β2試劑盒、人轉(zhuǎn)化生長因子β2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌B型探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 (AIL/APO 2L )   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Arctinol B  102054-39-7  中文名：  分子式：C13H12O2S2 

壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體   英文名稱：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AIL/APO 2L  Perforatumone  827319-50-6  中文名：  分子式：C35H52O5  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

壞死因子β   英文名稱：   Rat Tumor Necrosis Factor β   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNF  β  Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate  中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯  分子式：C23H34O4 

壞死因子α受體   英文名稱：   Human Tumor Necrosis Factor α Receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNFαR  Ritonavir  155213-67-5  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2 

化十六烷基   100g  3-O-Benzyl estrone  中文名：3-O-芐基雌酚酮  分子式：C25H28O2  度：98.0%

注意事項(xiàng)：

產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌B型探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。