PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f3-Aminoadamantan-1-ol  中文名：  分子式：C10H17NO    前列腺素 E1(PGE1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

3-Amino-5-phenylpyrazole  中文名：3-氨基-5-苯基吡唑  分子式：C9H9N3    血小板生成素   英文名稱：   Thromboietin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TPO

3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole  中文名：3-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑  分子式：C2H4N4S    總蛋白S   英文名稱：   total protein S   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TPS

3-Amino-4-methylbenzamide  中文名：3-氨基-4-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    壞死因子相關凋亡誘導配體   英文名稱：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AIL/APO 2L

3-Amino-4-hydroxybenzoic acid  中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3    壞死因子相關凋亡誘導配體受體1   英文名稱：   tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AIL R1

小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Nandrolone  中文名：諾龍  分子式：C18H26O2  度：98.0%

小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Convallatoxin  中文名：鈴蘭毒苷  分子式：C29H42O10 

小鼠孕受體elisa試劑盒   小鼠孕受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠孕受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠孕受體試劑盒、小鼠孕受體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Naftopidil dihydrochloride  中文名：鹽酸萘哌地爾  分子式：C24H30Cl2N2O3  度：98.0%

小鼠孕受體(PROGR)ELISAkit   ELISA.   96T/48T  Naftifine hydrochloride  中文名：鹽酸萘替芬  分子式：C21H22ClN  度：98.0%

小鼠孕激素elisa試劑盒   小鼠孕激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠孕激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠孕激素試劑盒、小鼠孕激素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Naftopidil dihydrochloride  中文名：鹽酸萘哌地爾  分子式：C24H30Cl2N2O3

Methyl (3R)-3-(tert-butyldimethylsilyloxy)-5-oxo-6-triphenylphosphoranylidenehexanoate  147118-35-2  中文名：  分子式：C31H39O4PSi    人組織蛋白酶Kelisa試劑盒   人組織蛋白酶K試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組織蛋白酶K試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶K試劑盒、人組織蛋白酶K elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl  114772-54-2  中文名：  分子式：C14H10BrN    人組織蛋白酶Delisa試劑盒   人組織蛋白酶D試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組織蛋白酶D試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人組織蛋白酶D試劑盒、人組織蛋白酶D elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate  99464-83-2  中文名：  分子式：C9H15ClO3    人組織蛋白酶D(cath-D)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Methyl 2-ethoxybenzimidazole-7-carboxylate  150058-27-8  中文名：  分子式：C11H12N2O3    人組織蛋白酶B(cath-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

1-Ethyl-3-nitrophthalate  16533-45-2  中文名：  分子式：C10H9NO6    人組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒廠家快速真菌DNA提取試劑盒   50T  3-O-Methyl-Estrone  中文名：3-氧甲基基雌酮  分子式：C19H24O2  度：98.0%

快速H－E組織細胞及脫落細胞染液   Phosphate buffer                 3-Amino-3-phenyl-1-propanol  中文名：3-氨基-3-苯基-1-丙醇  分子式：C9H13NO 

跨膜蛋白100   英文名稱：   Human ansmembrane protein 100   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TMEM100  Ritonavir  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2 

口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Phenformin hydrochloride  中文名：鹽酸苯乙雙胍  分子式：C10H16ClN5 

口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T  Phenformin hydrochloride  834-28-6  中文名：鹽酸苯乙雙胍  分子式：C10H16ClN5  度：98.0%

注意事項：

倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。