PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f5-Azacytidine  中文名：5-氮胞苷  分子式：C8H12N4O5    堿性0酸酶（AKP）檢測   Acid phosphatase (ACP) detection

5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal  中文名：  分子式：C21H32O3    酸性0酸酶（ACP）檢測   Prostate acid  enzyme (PACP) detection

5-Aminouracil  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2    前列腺酸性0酶（PACP）檢測   Glamine syhetase (GS) detection              

5-Aminosalicylic acid  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3    胰蛋白酶1:250   250g

5-Aminoindole  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2    ypsin1:250,PorcinePancreas   25g

胸苷酸合成酶   英文名稱：   thymidylate syhase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TS  Pazufloxacin mesilate  163680-77-1  中文名：甲磺酸帕珠沙星  分子式：C17H19FN2O7S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

性激素結(jié)合球蛋白   英文名稱：   Sex Hormone Binding Globulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SHBG  O-Benzyl-L-serine  中文名：O-芐基-L-絲氨酸  分子式：C10H13NO3  度：98.0%

型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   Human hea Fatty Acid Binding Protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   hFABP  n-Tritriacontan-16,18-dione  中文名：  分子式：C33H64O2  度：%

猩紅熱鏈球菌(ST)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Norfloxacin lactate  中文名：乳酸諾氟沙星  分子式：C19H24FN3O6  度：98.0%

新霉素   5g  Zidovudine  30516-87-1  中文名：齊多夫定  分子式：C10H13N5O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

Benzofuroxan  480-96-6  中文名：苯并呋咱  分子式：C6H4N2O2    山羊壞死因子αelisa試劑盒   山羊壞死因子α試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊壞死因子α試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊壞死因子α試劑盒、山羊壞死因子α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

(2-Benzothiazolylthio)acetic acid  6295-57-4  中文名：2-(苯并噻唑基硫代)乙酸  分子式：C9H7NO2S2    山羊生長激素釋放多肽elisa試劑盒   山羊生長激素釋放多肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊生長激素釋放多肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊生長激素釋放多肽試劑盒、山羊生長激素釋放多肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Anthraquinone-1,5-disulfonic acid disodium salt  853-35-0  中文名：蒽醌-1,5-二磺酸二鈉鹽  分子式：C14H6Na2O8S2    山羊白介素4elisa試劑盒   山羊白介素4試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊白介素4試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊白介素4試劑盒、山羊白介素4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

2-(Morpholinodithio)benzothiazole  95-32-9  中文名：2-(4-嗎啉基二硫代)苯并噻唑  分子式：C11H12N2OS3    山羊白介素10elisa試劑盒   山羊白介素10試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊白介素10試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：山羊白介素10試劑盒、山羊白介素10 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

(1S,2R)-1-Amino-2-indanol  126456-43-7  中文名：(1S,2R)-1-氨基-2-茚醇  分子式：C9H11NO    山羊壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

麥芽香肉桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片人CD30分子elisa試劑盒   人CD30分子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人CD30分子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人CD30分子試劑盒、人CD30分子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Schleicheol 1  256445-66-6  中文名：  分子式：C30H52O2 

人CD14分子elisa試劑盒   人CD14分子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人CD14分子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人CD14分子試劑盒、人CD14分子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Testosterone benzoate  2088-71-3  中文名：17-安息香酸雄烯醇酮  分子式：C26H32O3 

人B細胞瘤因子2(Bcl-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Chloromethyl-3-methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine hydrochloride  中文名：  分子式：C9H10Cl2F3NO  度：98.0%

人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Aminofluorene  153-78-6  中文名：2-氨基芴  分子式：C13H11N 

人BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-C-Methyl-D-erythritol  58698-37-6  中文名：2-C-甲基-D-赤蘚糖醇  分子式：C5H12O4

注意事項：

麥芽香肉桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。