PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f6-Amino-1-methyl-5-nitrosouracil  中文名：  分子式：C5H6N4O3    乙醇脫氫酶（ADH）測定試劑盒（紫外比色法）

6-Amino-1,3-dimethyluracil  中文名：  分子式：C6H9N3O2    微量游離血紅蛋白（FHb）測定試劑盒（比色法）

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3    超微量Na+K+–ATP酶測定試劑盒

6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  中文名：6,6'- 二芥子?；崽?/span>  分子式：C34H42O19    胰蛋白酶測定試劑盒（紫外比色法）                 

6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名：  分子式：C11H7ClN4O2    乙醇酸氧化酶測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

內(nèi)皮生長因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19 

內(nèi)皮生長因子 (VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone 17-benzoate  中文名：雄諾龍苯甲酸酯  分子式：C26H34O3  度：98.0%

緊張素轉(zhuǎn)化酶   英文名稱：   Angiotensin Conveing Enzyme   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACE  Otophylloside B  中文名：青陽參苷B  分子式：C49H78O16  度：97.0%

緊張素I(素、AngI)   96T/48T  Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%

緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   英文縮寫：   AT1R   規(guī)格：   48T/96T  Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%

3,3',4,4'-Benzophenone tetracarboxylic dianhydride  2421-28-5  中文名：3,3',4,4'-二苯甲酮四甲酸二酐  分子式：C17H6O7    神經(jīng)營養(yǎng)素3   英文名稱：   Neuroophin-3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   -3

1,2-Benzisothiazolin-3-one  2634-33-5  中文名：1,2-苯并異噻唑-3-酮  分子式：C7H5NOS    上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzoin methyl ether  3524-62-7  中文名：安息香甲基醚  分子式：C15H14O2    神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzanthrone  1982/5/3  中文名：苯并蒽酮  分子式：C17H10O    熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

L-(+)-Arginine  74-79-3  中文名：L-(+)-精氨酸  分子式：C6H14N4O2    腦素/腦尿肽(BNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

山羊皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書人谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzylsuccinic acid  3972-36-9  中文名：  分子式：C11H12O4 

人谷胱甘肽(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Benzylacrylic acid  中文名：  分子式：C10H10O2  度：98.0%

人干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  中文名：  分子式：C8H7NO4  度：98.0%

人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  中文名：  分子式：C8H7NO4 

人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              3-(1-Piperazinyl)-1,2-benzisothiazole  中文名：  分子式：C11H13N3S

注意事項(xiàng)：

山羊皰疹病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。