PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗，進(jìn)行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fBenzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3    檸檬酸（CA）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣           

Benzoyl-L-histidine  中文名：苯甲?；?/span>-L-組氨酸  分子式：C13H13N3O3    轉(zhuǎn)鐵蛋白   英文名稱：   Human ansferrin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TF

Benzoyleneurea  中文名：亞苯甲?；?/span>  分子式：C8H6N2O2    人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體   英文名稱：   soluable ansferritin receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sTFeR

Benzoyl-DL-valine  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3    人肌聯(lián)蛋白   英文名稱：   Human titin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TTN

Benzoyl-DL-methionine  中文名：苯甲?；?/span>-DL-蛋氨酸  分子式：C12H15NO3S    人血栓調(diào)節(jié)蛋白   英文名稱：   thrombomodulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TM

乙型肝炎病毒e抗原   英文名稱：   Human Hepatitis B e Aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HBeAg  n-Tritriacontan-16,18-dione  24514-86-1  中文名：  分子式：C33H64O2 

乙酰輔酶A羧化酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Propranolol hydrochloride  中文名：鹽酸普萘洛爾  分子式：C16H22ClNO2  度：98.0%

乙酰丁香   100mg  Propafenone hydrochloride  中文名：鹽酸普羅帕酮  分子式：C21H28ClNO3  度：98.0%

乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）檢測   Detection of the ache of the choline  Prilocaine hydrochloride  中文名：鹽酸丙胺卡因  分子式：C13H21ClN2O 

乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）測定試劑盒（測組織）（紫外比色法）  Propacetamol hydrochloride  中文名：鹽酸丙帕他莫  分子式：C14H21ClN2O3

3-Amino-2-naphthoic acid  5959-52-4  中文名：3-氨基-2-萘甲酸  分子式：C11H9NO2    肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A   英文名稱：   Pulmonary surfacta associated protein type A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-A

(S)-(-)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol  78606-95-9  中文名：(S)-(-)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇  分子式：C17H21NO    β-谷甾醇   英文名稱：   β Sitosterol   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   β Sitosterol

4-Amino-N-methylbenzamide  6274-22-2  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    同型半胱酸（Hcy）測定試劑盒（酶循環(huán)法）

6-Aminoindole  5318-27-4  中文名：6-氨基吲哚  分子式：C8H8N2    β-（D3-H）測定試劑盒（酶比色法）

Aminophenazone  58-15-1  中文名：氨基比林  分子式：C13H17N3O    D-二聚體（D-Dimer）測定試劑盒（膠乳增強比濁法）

伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家人周期素依賴性激酶1elisa試劑盒   人周期素依賴性激酶1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人周期素依賴性激酶1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴性激酶1試劑盒、人周期素依賴性激酶1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     2-Hydroxyquinoxaline  中文名：  分子式：C8H6N2O 

人周期素依賴性激酶1(CDK1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human CDK1 (Cyclin Depende Kinase 1) ELISA Kit  2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  17241-40-6  中文名：  分子式：C15H10O3  度：%  關(guān)鍵詞：  白花蛇舌草; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H28INO3  度：98.0%

人重組激活基因2elisa試劑盒   人重組激活基因2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人重組激活基因2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人重組激活基因2試劑盒、人重組激活基因2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  2-Flurbiprofen  51543-40-9  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  中文名：  分子式：C15H10O3

注意事項：

伯克氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。