PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fDrospirenone  中文名：屈螺酮  分子式：C24H30O3    豬腦素elisa試劑盒   豬腦素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬腦素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬腦素試劑盒、豬腦素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Dronedarone hydrochloride  中文名：鹽酸決奈達(dá)隆  分子式：C31H45ClN2O5S    豬肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶（CACT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Drevogenin A  中文名：  分子式：C28H42O7    豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dregeoside Ga1  中文名：  分子式：C49H80O17    豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dregeoside Da1  中文名：  分子式：C42H70O15    豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

質(zhì)粒小量提取試劑盒   Plasmid Exaction Kit  Torososide A  中文名：  分子式：C38H32O15  度：%

質(zhì)粒大量提取試劑盒（非柱式法）   5T  Tranexamic acid  中文名：凝血酸  分子式：C8H15NO2  度：98.0%

質(zhì)粒大量提取試劑盒   5T  Uzarigenin digitaloside  61217-80-9  中文名：  分子式：C30H46O8  度：97.5%  關(guān)鍵詞：  夾竹桃; 強(qiáng)心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

質(zhì)粒大量提取試劑盒   5T  trans-4-Aminocyclohexanol  中文名：  分子式：C6H13NO  度：98.0%

志賀氏菌(SH)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Trazodone hydrochloride  中文名：鹽酸曲唑酮  分子式：C19H23Cl2N5O  度：98.0%

Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%  兔子白介素2elisa試劑盒   兔子白介素2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔子白介素2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子白介素2試劑盒、兔子白介素2elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

β-Sitosterol  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O  度：98.0%  人α2巨球蛋白elisa試劑盒   人α2巨球蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人α2巨球蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人α2巨球蛋白試劑盒、人α2巨球蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Thevetin B  中文名：  分子式：C42H66O18  度：97.5%  兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

6,7-Dihydroneridienone A  中文名：  分子式：C21H28O3  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dregeoside A11  中文名：  分子式：C55H88O22  度：%  兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

伯氏疏螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒廠家生長(zhǎng)激素   英文名稱：   growth hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HGH  Przewaquinone A  76843-23-7  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  抗腫瘤; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

生長(zhǎng)分化因子-3   英文名稱：   growth differeiation factor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GDF-3  3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone  899822-97-0  中文名：  分子式：C17H25NO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

生長(zhǎng)分化因子 -3(GDF-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Nitrendipine  39562-70-4  中文名：尼群地平  分子式：C18H20N2O6 

生長(zhǎng)分化因子 -15(GDF-15)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone  中文名：  分子式：C17H25NO3 

生化檢測(cè)試劑盒  3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol  116539-55-0  中文名：  分子式：C8H13NOS  度：98.0%

注意事項(xiàng)：

伯氏疏螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。