服務流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：包納米蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家

英文名稱：Bonamia spp.

貨號: GOY-M3734

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

βEthyl 13-hydroxy-α-linolenate  中文名：  分子式：C20H34O3    豬藍耳病毒elisa試劑盒   豬藍耳病毒試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬藍耳病毒試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬藍耳病毒試劑盒、豬藍耳病毒eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Ethyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  中文名：  分子式：C20H36O3    豬內(nèi)皮素   英文名稱：   Porcine Endothelin 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ET-1

Ethyl (1-hydroxy-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-yl)acetate  中文名：  分子式：C10H12O4    豬上腺素   英文名稱：   Porcine    規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EPI

Ethopabate  中文名：乙氧酰胺苯甲酯  分子式：C12H15NO4    豬游離脂肪酸   英文名稱：   Porcine free Fatty Acid   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FFA

Estrone  中文名：雌酮  分子式：C18H22O2    豬胰島素樣生長因子2   英文名稱：   Porcine Insulin like Growth Factor 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IGF-2

中性粒細胞蛋白酶抑制劑Elafin   英文名稱：   neuophil elastase inhibitor Elafin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Elafin  β-Sitosterol  83-46-5  中文名：β-谷甾醇  分子式：C29H50O 

中性粒細胞彈性蛋白酶   英文名稱：   Neuophil elastase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NE  Tetracaine  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2  度：98.0%

中性蛋白酶測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  Tetracaine hydrochloride  中文名：鹽酸丁卡因  分子式：C15H25ClN2O2  度：98.0%

中心粒細胞彈性蛋白酶 (Neuophil elastase)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Testosterone isocaproate  15262-86-9  中文名：異己酸睪酮  分子式：C25H38O3 

中文名稱   方法   規(guī)格  Tolvaptan  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3  度：98.0%

Prosapogenin A  中文名：薯蕷次皂苷A  分子式：C39H62O12  度：%  兔熱休克蛋白70elisa試劑盒   兔熱休克蛋白70試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔熱休克蛋白70試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白70試劑盒、兔熱休克蛋白70elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17  度：%  兔熱休克蛋白40elisa試劑盒   兔熱休克蛋白40試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔熱休克蛋白40試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白40試劑盒、兔熱休克蛋白40 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Dehydroepiandrosterone  中文名：脫氫表雄酮  分子式：C19H28O2  度：99.0%  兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Gracillin  中文名：纖細薯蕷皂苷  分子式：C45H72O17  度：98.0%  兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Otophylloside B 4'''-O-α-L-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19  度：97.5%  兔抗單核細胞抗體(AMA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

包納米蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家四甲基化銨   100g  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  1533-45-5  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2  度：98.0%   

水質(zhì)檢測儀、比色計專用試劑   Water quality detector, colorimeic reage  4-(Phenylthio)benzyl alcohol  6317-56-2  中文名：  分子式：C13H12OS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

水質(zhì)讀卡儀器   Water quality reading card insume  4-(N-Methyl)-aminoantipyrine  519-98-2  中文名：  分子式：C12H15N3O  度：95.0%  關(guān)鍵詞： 

水硬度快速測試盒   Water hardness rapid test case  α-Spinasterol glucoside  1745-36-4  中文名：α-菠甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 豆甾烷; 甾苷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

水樣中六價鉻離子（Cr6+）濃度測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-(4-Fluorophenyl)-6-isopropyl-2-[(N-methyl-N-methylsulfonyl)amino]pyrimidinyl-5-yl-formyl  147118-37-4  中文名：  分子式：C16H18FN3O3S

使用方法：

包納米蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）