概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

牡蠣包拉米蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fEthyl 2-(4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C13H13NO3S    豬可溶性細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H13NO4S    豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Ethyl 2-(3-cyano-4-isobutoxyphenyl)-4-methyl-5-thiazolecarboxylate  中文名：  分子式：C18H20N2O3S    豬球蛋白Gelisa試劑盒   豬球蛋白G試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬球蛋白G試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬球蛋白G試劑盒、豬球蛋白Geisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Ethyl 2-(3-cyano-4-hydroxyphenyl)-4-methyl-1,3-thiazole-5-carboxylate  中文名：  分子式：C14H12N2O3S    豬球蛋白Eelisa試劑盒   豬球蛋白E試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬球蛋白E試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬球蛋白E試劑盒、豬球蛋白Eeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C23H19N3O4    豬流行性腹瀉病毒抗體elisa試劑盒   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬流行性腹瀉病毒抗體試劑盒、豬流行性腹瀉病毒抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

中性粒細(xì)胞趨化蛋白-2   英文名稱：   neuophilicgranulocyte chemokines Protein 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GCP-2  Androstenediol  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2 

中性粒細(xì)胞趨化蛋白 -2(GCP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Nitrendipine  中文名：尼群地平  分子式：C18H20N2O6 

中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)性載脂蛋白   英文名稱：   Neuophil gelatinase-associated lipocalin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NGAL  3-Hydroxychimaphilin  中文名：3-羥基梅笠草素  分子式：C12H10O3  度：98.0%

中性粒細(xì)胞活化肽 (NAP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Testosterone isocaproate  中文名：異己酸睪酮  分子式：C25H38O3  度：98.0%

中性粒細(xì)胞防御素   英文名稱：   Neuophil Peptide-1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HNP-1  Testosterone undecanoate  中文名：十一酸睪酮  分子式：C30H48O3  度：98.0%

Estradiol  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Estrone  中文名：雌酮  分子式：C18H22O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Cynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8  度：98.5%  兔子胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%  兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒   兔色素上皮衍生因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔色素上皮衍生因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%  兔熱休克蛋白90elisa試劑盒   兔熱休克蛋白90試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

牡蠣包拉米蟲探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒運(yùn)輸蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Amino-N-methylbenzamide  6274-22-2  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O 

蘇木素染液   Fast HE tissues and exfoliated cells of dye  4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine  145783-14-8  中文名：  分子式：C7H7Cl2N3O2S 

松弛素-2   英文名稱：   Human Relaxin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   RLN-2  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2  度：98.0%

四硼酸   5kg  4,5-Dimethoxy-1-cyanobenzocyclobutane  中文名：  分子式：C11H11NO2  度：98.0%

四甲基聯(lián)   5g  4-(Phenylthio)benzyl alcohol  中文名：  分子式：C13H12OS  度：98.0%