PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

邊緣無漿體 無形體 探針法熒光定量PCR試劑盒運輸簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

fRosiglitazone maleate  中文名：馬來酸羅格列酮  分子式：C22H23N3O7S    人chemerinelisa試劑盒   人chemerin試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人chemerin試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人chemerin試劑盒、人chemerin elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Rosiglitazone  中文名：羅格列酮  分子式：C18H19N3O3S    人12羥二十烷四烯酸elisa試劑盒   人12羥二十烷四烯酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人12羥二十烷四烯酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人12羥二十烷四烯酸試劑盒、人12羥二十烷四烯酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Ropivacaine mesylate  中文名：甲磺酸羅哌卡因  分子式：C18H30N2O4S    植物維生素K1(VK1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ropivacaine hydrochloride  中文名：鹽酸羅哌卡因  分子式：C17H27ClN2O    植物維生素E(VE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Roflumilast  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3    植物維生素D3(VD3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16 

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-U)核酸檢測試劑盒   48T  Sprengerinin C  88861-91-0  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%  關鍵詞：  抗腫瘤; 麥冬; 螺甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

豬圓環(huán)病毒通用型(PCV-Ⅰ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 Sprengerinin C  88861-91-0  中文名：  分子式：C44H70O16 

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Rubioncolin C  中文名：  分子式：C27H22O6  度：98.0%

豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測試劑盒   48T  Rubioncolin C  中文名：  分子式：C27H22O6

Perospirone hydrochloride  中文名：鹽酸哌羅匹隆  分子式：C23H31ClN4O2S  度：98.0%  兔血清總補體(CH50)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Sildenafil citrate  中文名：枸櫞酸西地那非  分子式：C28H38N6O11S  度：98.0%  兔乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Amlexanox  中文名：氨來呫諾  分子式：C16H14N2O4  度：98.0%  兔誘導型合成酶(iNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Losartan  中文名：氯沙坦  分子式：C22H23ClN6O  度：98.0%  兔子孕激素elisa試劑盒   兔子孕激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子孕激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子孕激素試劑盒、兔子孕激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Glyburide  中文名：格列本脲  分子式：C23H28ClN3O5S  度：98.0%  兔子胰島素樣生長因子1elisa試劑盒   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子胰島素樣生長因子1試劑盒、兔子胰島素樣生長因子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

邊緣無漿體 無形體 探針法熒光定量PCR試劑盒運輸兔子S100B蛋白(S-100B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Aminoindole  5318-27-4  中文名：6-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%   

兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Aminoindazole  6967-12-0  中文名：6-氨基吲唑  分子式：C7H7N3  度：98.0%   

兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid  90-51-7  中文名：6-氨基-4-羥基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

兔子C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid  90-51-7  中文名：6-氨基-4-羥基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S 

兔子C反應蛋白(CRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene  107934-60-1  中文名：9,9-雙(4-氨基-3-甲苯基)芴  分子式：C27H24N2

注意事項：

1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。