PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

fStavudine  中文名：司他夫定  分子式：C10H12N2O4    植物RNA提取試劑盒(溶液法）   24ml

Stauntosaponin A  中文名：  分子式：C28H38O7    PlanNAplus   40ml

Stanozolol  中文名：康力龍  分子式：C21H32N2O    質粒大量提取試劑盒   5T

Stanolone  中文名：雄諾龍  分子式：C19H30O2    PlasmidMaxiKit   10T              

Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16    植物草酸氧化酶(OxO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

轉基因植物Sad1基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Rosiglitazone  122320-73-4  中文名：羅格列酮  分子式：C18H19N3O3S  度：98.0%  關鍵詞： 

轉基因植物Sad1基因核酸檢測試劑盒   48T  Rosiglitazone maleate  155141-29-0  中文名：馬來酸羅格列酮  分子式：C22H23N3O7S  度：98.0%  關鍵詞： 

轉基因植物Sad1基因核酸檢測試劑盒   48T                 Rosiglitazone  122320-73-4  中文名：羅格列酮  分子式：C18H19N3O3S 

轉基因植物PRSV基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Roflumilast  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3  度：98.0%

轉基因植物PRSV基因核酸檢測試劑盒   48T  Roflumilast  中文名：羅氟司特  分子式：C17H14Cl2F2N2O3

Carvedilol  中文名：卡維地洛  分子式：C24H26N2O4  度：98.0%  金黃地鼠壞死因子α   英文名稱：   Golden hamster Tumor Necrosis Factor α   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TNFα

5-Aminosalicylic acid  中文名：5-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%  豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Norfloxacin  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3  度：98.0%  豚鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

Indapamide  中文名：吲達帕胺  分子式：C16H16ClN3O3S  度：98.0%  中文名稱   方法   規(guī)格

Loperamide hydrochloride  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2  度：98.0%  豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書兔子促上腺皮質激素(ACTH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Thevetin B  27127-79-3  中文名：  分子式：C42H66O18 

兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   兔子促甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子促甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子促甲狀腺素試劑盒、兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  36450-02-9  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2  度：95.0%  關鍵詞：  菜豆; 櫟木; 接骨木屬; 豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   兔子促甲狀腺素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子促甲狀腺素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子促甲狀腺素試劑盒、兔子促甲狀腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  6-O-Methylcerevisterol  126060-09-1  中文名：  分子式：C29H48O3  度：97.0%  關鍵詞：  靈芝; 麥角甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

兔子促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-O-Feruloylglucose  137887-25-3  中文名：6-O-阿魏酰葡萄糖  分子式：C16H20O9  度：97.5%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

兔子促甲狀腺素(TSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose  202337-44-8  中文名：6-O-對羥基苯甲酰葡萄糖  分子式：C13H16O8  度：98.0%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

注意事項：

1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。