漢坦病毒通用型（HTV-U）熒光PCR法檢測試劑盒
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：漢坦病毒通用型（HTV-U）檢測試劑盒(熒光 PCR 法)
Name  ： Hantavirus Detection Kit(Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測病患血液、尿液及病變組織中的漢-坦病毒 RNA，適用于漢-坦病毒感染的輔助診斷。 【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒對(duì)漢-坦病毒基因組保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)漢-坦病毒 RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

注：
1）不同批號(hào)試劑不能混用。
2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5 次，有效期12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】
抽取全血5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，或采集患者尿液、病變組織。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1 樣本前處理
血液：直接取100μL 于滅菌離心管中或取血清100ul 于滅菌離心管中
尿液：取100μL 于滅菌離心管中；
組織樣品：稱取組織樣品約 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，勻漿后取 100μL
于1.5mL 滅菌離心管中；
1.2 核酸提取
推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；反應(yīng)管數(shù)每滿10 份，多配制1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX

選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct 值≤32；
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司