禽白血病病毒(ALV)檢測試劑盒(RT-PCR法)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：禽白血病病毒(ALV)檢測試劑盒(RT-PCR法)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測樣本中的禽白血病病毒 (ALV) 用于禽白血病病毒 (ALV) 感染的輔助診斷。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對禽白血病病毒 (ALV) 特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對禽白血病病毒 (ALV) 的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于對可疑感染者的病原學(xué)檢測。

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【核酸提取】

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進(jìn)行核酸提取，請按照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.    試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份，多配制 1 份），每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21μL/管。

2.    加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

3.    PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

3.1  將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

3.2  設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

3.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

4.    結(jié)果分析判定

4.1  結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)）、stop 值（一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)），以及 Threshold的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結(jié)果。

4.2  結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35值≤38，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35值≤38，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

5.    質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

6.    檢測方法的局限性

6.1 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

6.2 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

6.3 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

6.4 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.5 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

6.6 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

6.7  本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項(xiàng)】

1.    所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

2.    試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.    反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.    反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.    使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.    樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

7.    實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.    試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

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