NanoDrop ND-2000 超微量分光光度計(jì)是NanoDrop 的zei新產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，

樣品體積只需要0.5~2ul，在偵測(cè)臺(tái)上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、

高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材偵測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。它使用高能量氙燈（pulsed xenon

flash lamp）可提供190~840nm 的全光譜偵測(cè)，且不需要暖機(jī)，開機(jī)后立即使用。搭配高感

度CCD array 偵測(cè)器，偵測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA 濃度2~15000ng/ul），大部分純

化后的幾乎都不需要稀釋即可偵測(cè)。

待測(cè)樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000 的zei高要求，一般、蛋白質(zhì)樣品能在偵測(cè)前以

vortex mixer 震勻?yàn)閦ei佳，若無vortex mixer 也應(yīng)以pipette 吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic

DNA 可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55 ?C 加熱約一分鐘，使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，

以確保2ul 具有代表性。

偵測(cè)時(shí)選擇不同偵測(cè)模式，可以得到zei快速的結(jié)果：

● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、

260/280 ratio、260/230 ratio 及濃度。

● UV-Vis – 190~840nm 間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜（以1mm 光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280 蛋白質(zhì)定量法– 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、260/280 ratio 及蛋

白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction

coefficient）方可計(jì)算。

● BCA、Bradford 及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線

并計(jì)算R square，待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)偵測(cè)模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry 三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間

會(huì)逐漸加深，使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在zei佳時(shí)間內(nèi)完成偵測(cè)，

以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線zei多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品zei多可做五重復(fù)。

* 測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用2ul，每個(gè)樣品偵測(cè)后需以labwipe 擦拭15~20 回，以避免

呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。

二、技術(shù)參數(shù)：

1、波長(zhǎng)范圍: 190-840nm；

2、波長(zhǎng)精度: 1nm；

3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)；

4、其它: 1mm 光程長(zhǎng)度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；

5、檢測(cè)下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、檢測(cè)上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率度：0.002 absorbance (1mm 光程)；

8、吸光率準(zhǔn)確性：2%(at 0.76 at 257 nm)；

9、吸光率范圍：0.02-300 (相當(dāng)于10mm 光程)；

10、檢測(cè)周期：< 5s；

11、體積：14cm×20cm。

三、使用方法舉例：

dsDNA：在主畫面點(diǎn)選Nucleic Acid，計(jì)算機(jī)與儀器自動(dòng)完成聯(lián)機(jī)。依照DNA 所溶于之液

體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一組kit 的elution buffer）取

出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選DNA-50，

在Sample ID 位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂后再

按Measure。

四、結(jié)果整理：

NanoDrop2000 軟件在偵測(cè)一開始會(huì)詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會(huì)存在上一

個(gè)使用者的檔案內(nèi)。

五、注意事項(xiàng)：

1、偵測(cè)后立即使用拭鏡紙（Kimwipe 類）擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走，再

將此laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內(nèi)部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦

5 次，Protein 擦20 次）。

2、同一滴液體只能做一次偵測(cè)，欲重復(fù)定量同一樣品，請(qǐng)擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行

偵測(cè)。

3、基本上樣品可使用1~2ul 做測(cè)量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原

則上不超過2ul。并請(qǐng)使用2ul pipette 避免體積不足導(dǎo)致液柱無法完整形成。唯蛋白質(zhì)

樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul 進(jìn)行偵測(cè)。

4、當(dāng)軟件跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀并依指示進(jìn)行障礙排除。zei常發(fā)生的情形是在偵測(cè)

過程液柱并未正確形成，軟件會(huì)出現(xiàn)以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下

臺(tái)面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測(cè)，必要時(shí)可將樣

品體積加大至2ul。

5、不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其它無腐蝕性之液體皆可使用。

六、日常與定期維護(hù)：

1、平時(shí)保持臺(tái)面及儀器本身清潔。

2、定期校正。