NanoDrop ND-2000 超微量分光光度計是NanoDrop 的zei新產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，

樣品體積只需要0.5~2ul，在偵測臺上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、

高濃度、免石英管、免毛細管等耗材偵測吸收值的優(yōu)點。它使用高能量氙燈（pulsed xenon

flash lamp）可提供190~840nm 的全光譜偵測，且不需要暖機，開機后立即使用。搭配高感

度CCD array 偵測器，偵測吸收值可高達300Abs（dsDNA 濃度2~15000ng/ul），大部分純

化后的幾乎都不需要稀釋即可偵測。

待測樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000 的zei高要求，一般、蛋白質(zhì)樣品能在偵測前以

vortex mixer 震勻為zei佳，若無vortex mixer 也應(yīng)以pipette 吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic

DNA 可能因前述動作而斷裂，則改以55 ?C 加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，

以確保2ul 具有代表性。

偵測時選擇不同偵測模式，可以得到zei快速的結(jié)果：

● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、

260/280 ratio、260/230 ratio 及濃度。

● UV-Vis – 190~840nm 間所有波長的吸收值及光譜（以1mm 光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280 蛋白質(zhì)定量法– 280nm 吸收值（換算成10mm 光徑吸收值）、260/280 ratio 及蛋

白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction

coefficient）方可計算。

● BCA、Bradford 及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結(jié)果，自動畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線

并計算R square，待測蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)偵測模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry 三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時間

會逐漸加深，使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在zei佳時間內(nèi)完成偵測，

以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個標(biāo)準(zhǔn)曲線zei多可有七個標(biāo)準(zhǔn)品，每個標(biāo)準(zhǔn)品zei多可做五重復(fù)。

* 測蛋白質(zhì)時樣品體積需使用2ul，每個樣品偵測后需以labwipe 擦拭15~20 回，以避免

呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。

二、技術(shù)參數(shù)：

1、波長范圍: 190-840nm；

2、波長精度: 1nm；

3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)；

4、其它: 1mm 光程長度（可自動調(diào)整到0.05mm）；

5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率度：0.002 absorbance (1mm 光程)；

8、吸光率準(zhǔn)確性：2%(at 0.76 at 257 nm)；

9、吸光率范圍：0.02-300 (相當(dāng)于10mm 光程)；

10、檢測周期：< 5s；

11、體積：14cm×20cm。

三、使用方法舉例：

dsDNA：在主畫面點選Nucleic Acid，計算機與儀器自動完成聯(lián)機。依照DNA 所溶于之液

體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一組kit 的elution buffer）取

出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選DNA-50，

在Sample ID 位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂后再

按Measure。

四、結(jié)果整理：

NanoDrop2000 軟件在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會存在上一

個使用者的檔案內(nèi)。

五、注意事項：

1、偵測后立即使用拭鏡紙（Kimwipe 類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走，再

將此laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內(nèi)部，折迭四次后以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦

5 次，Protein 擦20 次）。

2、同一滴液體只能做一次偵測，欲重復(fù)定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行

偵測。

3、基本上樣品可使用1~2ul 做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原

則上不超過2ul。并請使用2ul pipette 避免體積不足導(dǎo)致液柱無法完整形成。唯蛋白質(zhì)

樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul 進行偵測。

4、當(dāng)軟件跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀并依指示進行障礙排除。zei常發(fā)生的情形是在偵測

過程液柱并未正確形成，軟件會出現(xiàn)以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下

臺面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起后，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣

品體積加大至2ul。

5、不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其它無腐蝕性之液體皆可使用。

六、日常與定期維護：

1、平時保持臺面及儀器本身清潔。

2、定期校正。