基本信息：
產品名稱：磷脂酶A2(PLA2)可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/24樣
貨號：GOY-01S6660
分類：脂肪酸代謝系列
測定意義：
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂?；饷福瑥V泛存在于動植物組織、細菌、細胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細胞信號傳遞、脂質過氧化修復、宿主反應等生理過程，在控制體內磷脂類物質平衡、調節(jié)機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。

測定原理

磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產生游離巰基，與DTNB反應生成黃色物質，在412nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、超速冷凍離心機、研缽、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。產品僅用于科研
小鼠Mdm2小鼠p53結合蛋白同源物(MDM2)ELISA試劑盒 ，英文名： MDM2 ELISA Kit

人心肽(ANP)ELISA檢測試劑盒HumanAialNaiureticPeptide,ANPELISAKit 96T/48T

大鼠骨織素(Ostn)免疫試劑盒 Rat osteocrin,Ostn ELISA Kit

CLIAKitfor大鼠Smad1ELISAKit大鼠Smad1規(guī)格：48T/96T

0脂酰絲氨酸PS(phosphatidylserine)高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitIg-j人免疫球蛋白j鏈規(guī)格：48T/96T
小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human leukocyte aigen A (HLA-A) ELISA Kit 人類白細胞抗原A(HLA-A)ELISA試劑盒

HumanBeta-naphtholELISAKit 人β萘酚(β-naphthol)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor乙型肝炎二對半全套(立可讀)規(guī)格：48T/96T

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MouseIerleukin13,IL-13ELISAKit小鼠白介素13(IL-13)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-CC16/FITC 熒光素標記克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-HER2 receptor(NT)/FITC 熒光素標記抗c-erbB-2受體抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CEA(C3) 癌胚抗克隆抗體(包被) 規(guī)格 0.1ml

AKAP12A/SSeCKS peptide 絲酸抑制蛋白激酶C底物抗原 0.5mg

Integrin beta 3 英文名稱： 整合素β3抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Thymidylate synthase/TS 胸苷酸合成酶抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-HER2 receptor(NT)/FITC 熒光素標記抗c-erbB-2受體抗體(N端)IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
磷脂酶A2(PLA2)可見分光光度法檢測試劑盒Anti-TP II A/TOP2a/FITC 熒光素標記DNA拓普西異構酶ⅡA抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide 突觸相關蛋白-1(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

酪氨酸激酶A抗體 Anti-TrK A 0.1ml

SLU7 英文名稱： SLU7蛋白抗體 0.2ml

EN2 英文名稱： 同源盒蛋白轉錄因子EN2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-IRS1(Ser612) 0酸化胰島素受體底物-1抗體 規(guī)格 0.1ml

SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide 突觸相關蛋白-1(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。