測定意義：
PFK（EC 2.7.1.11）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，負責(zé)將果糖-6-磷酸和ATP轉(zhuǎn)化為果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶之一。

測定原理

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：磷酸果糖激酶（PFK）/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號：GOY-01S6605
分類：糖酵解系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當(dāng)換算。

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A8(S100A8)ELISA試劑盒 ，英文名： S100A8 ELISA Kit

人脂蛋白α(Lp-α)ELISA檢測試劑盒Humanlipoproteinα,Lp-αELISAKit 96T/48T

大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒 Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit

英文名稱Rat17-ANPELISAKit大鼠17-羥-孕同(17-ANP)規(guī)格：96T/48T

裂解液VII-2葡萄球菌裂解液

ELISAKitBGP/Gehrelin人腦腸肽規(guī)格：48T/96T
小鼠抑制素A(INH-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human granulysin (granulysin) ELISA Kit 人顆粒溶素(granulysin)ELISA試劑盒

HumanGasinELISAKit 人胃泌素(Gasin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-K-PGELISAKit大鼠6同前列腺素規(guī)格：48T/96T

飲料D-蘋果酸比色法定量檢測試劑盒20次

MousemammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit小鼠癌標志物-CA153ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
TAb(Human Thyroid Antibody) ELISA Kit 人甲狀腺抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體 規(guī)格 0.2ml

aFABP(Human adipocyte fatty acid-binding protein) ELISA Kit 人脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白 96T

Relaxin 1 英文名稱： 松弛肽/松弛素抗體 0.2ml

C12ORF68 英文名稱： 12號染色體開放閱讀框68抗體 0.2ml

Anti-ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
磷酸果糖激酶（PFK）/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶微量法檢測試劑盒Anti-TGF- BetaR 2/FITC 熒光素標記轉(zhuǎn)移生長因子–β受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

NKB (Neurokinins B) 神經(jīng)激肽B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

抗相關(guān)抗原5抗體 Anti-SPAG5/map126 0.1ml

SERPINB12 英文名稱： 絲酸蛋白酶抑制劑B12抗體 0.2ml

EHM2 英文名稱： EHM2蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAP4K4(Ser801) 0酸化原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 規(guī)格 0.1ml

NKB (Neurokinins B) 神經(jīng)激肽B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg