基本信息：
產品名稱：線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/48樣
貨號：GOY-01S6563
分類：氧化磷酸化系列
測定意義：
線粒體復合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產生的質子電化學梯度催化ATP合成，也可逆過程水解ATP。此外，復合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細菌中。復合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關鍵酶。

測定原理：

復合體Ⅴ水解ATP產生ADP和Pi，通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。產品僅用于科研
小鼠VGF神經(jīng)生長因子誘導蛋白(VGF)ELISA試劑盒 ，英文名： VGF ELISA Kit

大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA檢測試劑盒RatplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit 96T/48T

大鼠肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)免疫試劑盒 Rat Creatine Kinase MM isoenzyme,CK-MM ELISA Kit

英文名稱RatCCL1ELISAkit大鼠CCL1ELISAkit規(guī)格：96T/48T

藍色熒光染色體核型分析試劑盒100次

ELISAKitFⅢ人凝血因子Ⅲ規(guī)格：48T/96T
鴨α干擾素(IFN-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human adrenal coex aibody (AAA) ELISA Kit 人抗腎上腺皮質抗體(AAA)ELISA試劑盒

HumanFolicacid,FAELISAKit 人葉酸(FA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforAChEELISAKit大鼠乙酰膽堿酯酶規(guī)格：48T/96T

藥品阿斯巴塘(aspaame)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次

Mousephospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit小鼠0酸化細胞外信號調節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-CD20/Biotin 生物素化CD20抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-HOXc8/FITC 熒光素標記同源盒基因的一種抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh CDC27/ANAPC3 后期促進復合蛋白3抗體 規(guī)格 0.1ml

Adipo R1(adiponectin receptor 1) 脂聯(lián)素受體-1(抗原) 0.5mg

IBP160 英文名稱： 160kDa內含子結合蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh TDRD9/HIG1 缺氧誘導蛋白HIG1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-HOXc8/FITC 熒光素標記同源盒基因的一種抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶微量法檢測試劑盒Anti-phospho-Synapsin I (Ser9) /FITC 熒光素標記0酸化神經(jīng)突觸素1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

HSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

甲狀旁腺激素相關蛋白抗體 Anti-PTHrP 0.2ml

Phospho-Smad3 (Ser423 + Ser425) 英文名稱： 0酸化細胞信號轉導分子SMAD3抗體 0.1ml

EDG3 英文名稱： 內皮分化型G蛋白偶聯(lián)受體3抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Met (Tyr1003) 0酸化肝細胞生長因子受體(原癌基因)抗體 規(guī)格 0.1ml

HSP-60( Heat shock protein-60) 熱休克蛋白-60(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。