大鼠細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA試劑盒的原理：

ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。ELISA試劑盒在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體。

ELISA試劑盒樣本收集以及處理方法：

液體類標本：
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1）血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2）血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4）細胞培養(yǎng)上清：
A、檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）。仔細收集上清。
B、檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5）組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

【試劑盒特點】

A. 分子量大。合成肽采用化學方法制備，由于工藝的局限，合成數量有限，只能達到數百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原，分子量更大。
B. 穩(wěn)定性好。人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒包被的抗原的穩(wěn)定性可使試劑盒的效期得到保證，早期以合成肽為包被抗原的試劑盒效期只3-4個月，采用基因工程抗原后效期大大延長了。
C. 基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達，表達產物包含更多的抗原決定簇，可提高試劑盒的靈敏度，提高檢出率。
D. 純化難度大。基因工程抗原的純化技術難度較大。
合成多肽抗原是根據蛋白質抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。合成肽抗原有以下特點： a.分子量太小;b.一般只含有一個抗原決定簇;c.純度高;d.穩(wěn)定性差。

【實驗注意事項】

一、標本收集體積 100μl 。當天進行實驗標本儲存在4℃備用。標本2-8℃可以保存48小時；-20℃可以保存1個月，-70℃可以保存309個月。標本避免反復凍融。
二、血清標本采集避免溶血。紅細胞溶解時會釋放具有過氧化物酶活性物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。
三、標本宜在新鮮時代測。保存時間過長的樣本可能發(fā)生聚合，ELISA實驗中會使本底加深。
四、反復凍融會使蛋白效價降低，樣本可以少量分裝保存或者適當加入防腐劑。
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