上海滬震實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品: elisa試劑盒
大鼠(PTN)ELISA試劑盒廠家-高靈敏PTN檢測試劑盒
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¥1620.00
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主營產(chǎn)品
大鼠(PTN)ELISA試劑盒廠家-高靈敏PTN檢測試劑盒
在下面列出的基質(zhì)中加入一定含量的PTN,并通過將測量值與樣品中預(yù)期的PTN量進行比較來計算回收率。
矩陣 | 回收率% | 平均(%) |
---|---|---|
血清(n = 5) | 87-96 | 92 |
EDTA血漿(n = 5) | 91-103 | 96 |
肝素血漿(n = 5) | 85-105 | 93 |
通過測試摻有適當(dāng)濃度的PTN及其系列稀釋液的樣品,可以測定試劑盒的線性。通過計算濃度相對于預(yù)期濃度的百分比來證明結(jié)果。
樣品 | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
---|---|---|---|---|
血清(n = 5) | 88-103% | 85-94% | 88-99% | 86-103% |
EDTA血漿(n = 5) | 82-98% | 84-101% | 84-100% | 83-101% |
肝素血漿(n = 5) | 80-100% | 80-95% | 85-97% | 80-98% |
批間分析:CV <10%
實驗需準(zhǔn)備的 材料設(shè)備
1、酶標(biāo)儀
2、移液器及槍頭
3、洗板機
4、試管、離心管、量筒等
5、蒸餾水或去離子水
6、電熱恒溫箱
液體樣本的收集
1、血清:用無菌管收集,室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3、尿液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
4、胸腹水:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6、唾液:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
7、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
9、蜂蜜:用無菌管收集,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
10、全血:用含有抗凝劑的無菌管收集,立即輕輕搖動,來回輕輕顛倒數(shù)次,使血液和抗凝劑混勻,以防血液凝固。
固體樣本的收集
1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對于植物組織,不好勻漿的話,就在液氮中充分研磨。
2、細胞內(nèi)蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內(nèi)的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
(1)培養(yǎng)的細胞
A、動物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融(如果反復(fù)凍融,破碎效果不好,就采用超聲波破碎),以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
B、植物細胞:用 PH7.2-7.4 的 PBS 稀釋細胞懸液,使細胞濃度達到 100 萬/ml 左右,置于冰盒上,用超聲破碎儀,設(shè)置破碎 2s,冷卻 30s 的方式,充分破碎細胞,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)組織的細胞
切割標(biāo)本后,稱取 1g 組織,加入 9ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)/分),去除上清,再用 pH7.2-7.4左右的 PBS 小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。
3、細胞內(nèi)蛋白樣本:許多待測蛋白不是分泌蛋白,而是存在于細胞內(nèi)的蛋白,這個時候,要先收集細胞,洗滌干凈,再破碎細胞,離心取上清。
4、咽拭子:加入 2ml 的 pH7.2-7.4 左右的 PBS,溶解咽拭子頭部,搖勻,用鑷子取出咽拭子并擠干液體,2-8℃條件離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉(zhuǎn)分),仔細收集上清。分裝一份待檢測,其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。如果是測分泌蛋白,直接取上清檢測,測試細胞內(nèi)蛋白,要破碎細胞。
5、植物標(biāo)本:取組織塊(0.2g~0.5g)最少可到 5~10mg 在冰冷的 PBS 中漂洗,濾紙拭干,準(zhǔn)確稱重,放入 5ml 的勻漿管中;按重量(mg):體積(ml)=1:9 的比例加入 9 倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊;勻漿的方式:手工勻漿,機器勻漿。 ① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(6~8 分鐘),充分研碎,制成 20%的勻漿液。 ② 機器勻漿:用組織搗碎機 10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成 10%組織勻漿,也可用內(nèi)切式組織勻漿機制備(勻漿時間 10 秒/次,間隙 30 秒,連續(xù) 3~5 次,在冰水中進行,可適當(dāng)延長勻漿時間),鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片、染色均可以),顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間。將制備好的 10%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機 4000 轉(zhuǎn)/分左右,離心 10~15 分鐘,取上清液進行測定。