雙尾RT-qPCR是什么呢？它是一種基于PCR法的miRNA定量檢測試劑盒。那么，就先從傳統(tǒng)microRNA PCR檢測法的痛點說起吧~

傳統(tǒng)的PCR法檢測microRNA，兩個常規(guī)PCR引物的總長度幾乎是microRNA長度的兩倍，因此不適合于做miRNA的引物。以前的技術(shù)通過使用發(fā)夾引物延伸microRNA，添加poly A尾巴或通過連接添加片段來解決這個問題，但是這會降低檢測的靈敏度和特異性。此外，這些方法無法檢測在3'末端修飾的microRNA，因為它會干擾延伸過程。

好了，說到這里，在鄭重向大家介紹這款名為雙尾RT-qPCR技術(shù)。它的原理如下：

與使用單個結(jié)合探針不同，雙尾PCR使用兩個半探針，它們分別結(jié)合到不同的microRNA片段上，這些片段通過折疊的系鏈連接。雖然每個半探針本身都很短, 無法結(jié)合到microRNA上，但當(dāng)兩個半探針互補時，它們會協(xié)同結(jié)合，這種結(jié)合的特異性是非常高的，因為在短半探針中錯配的影響非常大。然后可以使用兩個特定序列引物對形成的cDNA進行PCR擴增，用SYBR進行檢測。

怎么樣，有沒有明白一點了，那么接下來，了解一下它的優(yōu)勢吧！

1.高靈敏度：zui多少于10個分子；

2.高特異性

適合于多種樣本（血漿/血清，血液，組織等）中的miRNA檢測和定量

通過折疊的系鏈連接的兩個半探針（結(jié)合不同的microRNA片段）

動態(tài)范圍廣（高達9 log）

在進行單重qPCR之前，可進行雙管多重RT-PCR

提供定制化服務(wù)

高靈敏度及特異性：

1）5′互補片段顯著提高分析的靈敏度：

2）5′ 互補片段顯著提高檢測的特異性：

適用樣本類型豐富：

檢測流程簡便：

文章來源：超高靈敏度和特異性miRNA定量方法——雙尾RT-qPCR

https://www.amyjet.com/featured/rt-qpcr-2.shtml