睿信生物-小鼠線粒體鈣離子單向轉運蛋白-MCU-ELISA試劑盒
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公司介紹
生物分析方法開發(fā)
分析方法驗證
高品質科研elisa試劑盒、化學發(fā)光試劑盒開發(fā)與定制
供科研使用,不得用于檢驗。
泉州市睿信生物科技有限公司是集研發(fā)、生產、銷售、服務及品牌代理為一體的生物技術公司,目前可提供各種抗體、免疫學試劑盒、生化試劑、分子生物學試劑等高品質產品及服務,涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。依托湖北武漢、江蘇南京、福建泉州三大研發(fā)及銷售 ,布局全國市場。
我們致力于為高等院校、研究機構、試劑廠家、生物制藥公司、動物造模公司等科研單位,提供高質量檢測試劑盒、方法學開發(fā)及實驗外包服務,為客戶的科學研究提供可靠的技術支持。公司干技術人員均有10年以上的從業(yè)經驗,是值得您信賴的科研伙伴!
企業(yè)建立了完善的研發(fā)系統和生產設備,并與知名高校、研究機構、 企業(yè)等建立戰(zhàn)略合作關系。公司自成立以來,就非常注重企業(yè)信息化的建設,我們采用了先進的內部供應鏈信息處理平臺,客戶的需求可以準確、處理。
為每一位科研人員獻上高品質的產品及服務是我們的使命。
樣本處理:
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
注意事項:
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射,不能使用過期產品。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
小鼠線粒體鈣離子單向轉運蛋白 MCU ELISA試劑盒
線粒體琥珀酰輔酶A轉移酶(SCOT)含有4個酪氨酸殘基,其4、76位點酪氨酸(Tyr4、Tyr76)的硝基化可導致其酶活性下降,制備特定的抗體可對其硝基化水平和位點進行檢測。應用淋巴細胞雜交瘤技術,以化學合成的含琥珀酰輔酶A轉移酶硝基化Tyr4和Tyr76肽段為半抗原,偶聯鑰孔血藍蛋白(KLH)后,作為免疫原免疫Balb/c小鼠,分離免疫鼠的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,獲得了多株融合細胞。經對融合細胞多次篩選和檢測,最終獲得4株單克隆抗體,分別對應SCOT Tyr4和Tyr76硝基化后表位,其間接ELISA檢測效價分別達到1∶128 000、1∶32 000、1∶512 000和1∶4 096 000,表明抗體具有較強特異性和靈敏度。
研究miR-181a對巨噬細胞表型轉化的調控作用及分子機制。方法:利用PMA誘導人白血病單核細胞系THP-1成為靜息態(tài)巨噬細胞(H-MΦ),培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7,分離小鼠骨髓來源巨噬細胞(BMDM),然后加入LPS和IFN-γ誘導為M1型巨噬細胞,加入IL-4誘導為M2型巨噬細胞;通過流式細胞儀和免疫熒光技術檢測特異性表面標記物CD86、CD206在不同類型巨噬細胞中表達;應用Real-timePCR和Westernblot方法檢測不同表型巨噬細胞中M1型和M2型特異性標志物IL-1β、CD163等m RNA及蛋白表達水平;采用ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)基中分泌因子的含量;熒光素酶報告基因技術分析mi R-181a對靶基因的靶向抑制作用;通過Transwell法檢測細胞的侵襲和遷移能力。結果:M2細胞中miR-181a表達量高于M1細胞,M1向M2轉化后可使mi R-181a的表達升高,當M2向M1表型誘導后,miR-181a的表達量降低;抑制M2型巨噬細胞內源性mi R-181a表達,可促進M1型巨噬細胞標志物TNFα,IL-1β,HLA-DR和CD86的表達,降低M2型巨噬細胞標志物。