【中文名稱】動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家

【英文名稱】Fluorescent qualitative PCR kit for animal diseases

【產(chǎn)品及特點】

動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家是基于熒光染料檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進行實時定量PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及新型熒光染料 DNAgreen 等所有實時定量 PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進行實時定量 PCR 反應(yīng)和 HRM 分析，具有廣泛的用途。

1. 方便，用戶只需準備模板和引物既可以進行實時定量 PCR 實驗和 HRM（High Resolution DNA Melt Curve Analysis）分析。而基于 SYBR Green I 和 LC Green 染料的 qPCR mix 則不能同時用于上述兩種實驗。

2. 使用第三代飽和型熒光染料，信號強，不會抑制 PCR 反應(yīng)。

3. 快捷，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟大大簡化，避免了交叉污染，降低實驗誤差。

4. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強。能檢測到濃度為 50 拷貝/mL 的靶分子。

動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家【規(guī)格及成分】

成分	100次熱封袋包裝
qPCR MagicMix，2×	1 mL
專一性引物對	200 μL
陽性對照	50 μL
超純水	1 mL
使用手冊	1 份

動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家【運輸及保存】

低溫運輸，-20℃保存, 保存期限為 6 個月。

【產(chǎn)品圖片】

 

【自備試劑】

DNA 模板、引物、超純水。

【使用方法】

1. 以 20 uL 的 qPCR 反應(yīng)體系為例：在一干凈的 PCR 管中，加入下列成分：

反應(yīng)體系成分	20 uL 體系	終濃度
qPCR MagicMix，2×	10 uL	1×
自備引物一 a	x uL	0.1-0.5 uM
自備引物二 a	x uL	0.1-0.5 uM
自備模板 a	x uL
自備 ROXb	2 uL	（可以不加）
補超純水到	20 uL

放入熒光 PCR 儀中進行擴增, 并在退火或延長步驟中記錄熒光信號。

注意：

a) 通常引物濃度以 0.2 μM 可得到較好結(jié)果，可以終濃度 0.1-1.0 μM 作為設(shè)定范圍的參考；通常 DNA模板的量以10-100 ng基因組 DNA或1-10 ng cDNA為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定*的模板使用量。

b) ROX 校正染料：如果使用 ABI 公司的 7500，7700 和 7900 三種型號的熒光 PCR 儀器，則需用自備的 ROX 進行 Ct 值校正。對 ABI 7700 和 7900，ROX 的*濃度為 1×（即在每 20 uL 反應(yīng)體系中加 2 uL 10×ROX）。對ABI 7500， ROX 的*濃度為 0.05-0.1×（每 20 uL 反應(yīng)體系加 0.1-0.2uL 10×ROX；也可將 10×ROX 稀釋到 1×，然后每個反應(yīng)體系加入 1-2 uL1×ROX）。ROX 會在溶解曲線中產(chǎn)生噪音，因此，如果出現(xiàn)了雜峰，將軟件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”選項取消打勾，然后重新分析數(shù)據(jù)。

對于 iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000, RotorGene3000，RotorGene 6000 和 LightCycler 480 等型號的熒光PCR 儀器，ROX 不是必須的，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。

2. 循環(huán)步驟：根據(jù)擴增子的性質(zhì)和儀器性能，從以下三個過程中任選一個進行擴增。

 

A：兩步快速循環(huán)法：適用于引物 Tm 值設(shè)計為 60℃的反應(yīng)

酶活化	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火&延伸	95℃ 60℃	15 s 1 min	35-40

注意：本產(chǎn)品所采用的熱啟動酶須在預(yù)變性 95℃、10 min 條件下實現(xiàn)酶的活化。

退火溫度請以 60-64℃作為設(shè)定范圍的參考，發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可提高退火溫度。

 

B：三步快速循環(huán)法：適用于延伸步驟溫度高于退火步驟的 PCR（長引物 PCR）

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火 延伸	95℃ 56-64℃ 72℃	10 s 30 s 32 s	35-40

動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家注意：

a) 退火溫度：建議采用兩步法 PCR，退火溫度 60℃進行反應(yīng)。若提高反應(yīng)特異性，可提高退火溫度，以 60-64℃作為設(shè)定范圍的參考。若因使用 Tm 值較低的引物等原 因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試進行三步法 PCR 擴增，三步法的退火溫度請以 56℃-64℃的范圍作為設(shè)定參考。延伸溫度：延伸溫度設(shè)為 72℃通常可以提高擴增效率。但是，對于 AT 含量大于 70%的擴增子來說，延伸溫度設(shè)為 60℃為宜。

 

C：通用循環(huán)法：這種循環(huán)方法適用于幾乎所有的熒光 PCR 儀，也適用于用快速循環(huán)法不能擴增的模版。

酶活化	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
酶活化	95℃	10 min	1
變性 退火&延伸	95℃ 60℃	15 s 60 s	35-40

3. 數(shù)據(jù)采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在沒結(jié)合 DNA 時，*吸收光譜在 471nm，結(jié)合 DNA 時的*吸收光譜在 500nm，*發(fā)射光譜在530nm。

其他注意事項：

1. 如果使用 iCycler，可以不加入 FAM。

2. 如果使用Roche LightCycler的玻璃毛細管進行PCR，需加入終濃度為0.5mg/mL的自備 BSA。

動物源性成分熒光PCR試劑盒廠家關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：

動物源性成分    XY-SG-D-1211    犬源性成分(Canine)核酸檢測試劑盒(P