睿信生物-人抗a胞襯蛋白抗體elisa試劑盒
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泉州市睿信生物科技有限公司
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福建省泉州市
產(chǎn)品詳情
泉州市睿信生物科技有限公司是集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務及品牌代理為一體的生物技術公司,目前可提供各種抗體、免疫學試劑盒、生化試劑、分子生物學試劑等高品質產(chǎn)品及服務,涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。
睿信生物擁有完善的技術服務團隊,嚴格的技術服務流程,獲得客戶的一致好評。
我們可以根據(jù)您的應用需要,比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。
試劑盒限制性
1、 僅供科研使用,不得用于臨床診斷。
2、 在試劑盒標示的有效期內使用,過期產(chǎn)品不得使用。
3、 跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。
4、 使用試劑盒配套的樣品稀釋液。
5、 如果樣本值高于最高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。
6、 待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果,檢測前,請排出該因素。
7、 通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。
技術提示
1、 混合蛋白溶液時,避免起泡。
2、 加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、 合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結果準確性的必要條件。
4、 使用自動洗板機時,加入一個30秒浸泡的步驟,可以提高檢測精度。
5、 底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。
6、 終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產(chǎn)物,會瞬間變?yōu)辄S色。
7、 實驗中,用剩的板條,應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
8、 所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。
試劑盒組分與保存
未開封的試劑盒保存在2-8度,不得使用過期試劑盒。
組分 | 數(shù)量 | 主要成分 | 開封后儲存 |
校準品 | 0.3ml/管 | -- | 2-8℃14天 |
包被微孔板 | 96T/48T | 預包被固相抗體 | 2-8℃14天 |
HRP標記抗體 | 10mL | HRP標記的檢測抗體 | 2-8℃14天 |
樣本稀釋液 | 6mL | -- | 2-8℃180天 |
底物液A | 6mL | 0.01%過氧化氫 | 2-8℃180天 |
底物液B | 6mL | 0.1%TMB | 2-8℃180天 |
終止液 | 6mL | 2mol/L稀硫酸 | 2-8℃180天 |
20×濃縮洗滌液 | 25mL | 0.05%Tween20 | 2-8℃180天 |
說明書 | 1份 | -- | -- |
自封袋 | 1個 | -- | -- |
不干膠 | 2片 | -- | -- |
校準品濃度依次為:200、 100、 50、 25、 12.5、 6.25 ng/mL。
其他用品
1、 酶標儀(450nm)
2、 精密移液器及一次性吸頭
3、 蒸餾水
4、 洗瓶或者自動洗板機
5、 37℃水浴鍋或恒溫箱
6、 500ml量筒
生物安全
1、 檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。
2、 試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過敏反應,避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、 底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。
4、 戴上防護手套,實驗完成后徹底洗手。
樣品的采集和儲存
以下只是列出樣品采集和保存的一般指南。所有樣本采集保存過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、 細胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復凍融。
2、 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在-20℃以下,避免反復凍融。
3、 血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復凍融。
樣本收集后,無法一次檢測完畢,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
4、 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,在冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎或反復凍融。最后將勻漿液5000×g離心 5-10分鐘,取上清檢測。
5、 細胞提取液:貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g離心5分鐘后收集細胞;懸浮細 胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每 1×106 個細胞中加入150-200μLPBS重懸并通過反復凍融使細胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心10分鐘,取上清檢測。
6、 其他生物體液:1000×g 離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
試劑準備
1、 使用前,所有的組分都要至少復溫60min,確保充分復溫到室溫。
2、 濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會有結晶產(chǎn)生,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋,即1份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
3、 底物:底物液A和B,在使用前,按1:1體積充分混合,混合后15分鐘內使用。
4、
結果計算
1、 以標準品濃度做為縱坐標(6個標準品孔,加1個0值孔,共7個濃度點),對應的吸光度(OD值)作為橫坐標,利用計算機軟件,采用四參數(shù)Logistic曲線擬合(4-pl),創(chuàng)建標準曲線方程,通過樣本的吸光度(OD值),利用方程計算樣品的濃度值。
2、 如果樣品被稀釋,通過上述方法測的濃度值,要乘以稀釋倍數(shù),才是樣品的最終濃度。
1、物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。
2、劑量反應曲線線性
校準品劑量反應曲線相關系數(shù)r值,大于等于0.9900。
3、精密度
批內精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數(shù)CV%小于10%。
批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。
4、靈敏度
最低檢出劑量小于1.0 ng/mL。
5、回收率
三組已知的高、中、低濃度樣品,進行五次在同一個板塊內回收率評估,回收率在85%-115%之間。
6、特異性
本試劑盒識別天然和重組人血紅蛋白A2(HbA2),與結構類似物無交叉。
7、穩(wěn)定性
2℃-8℃保存,有效期6個月。
5、 檢測范圍
6.25 ng/mL – 200 ng/mL。