上海烜雅生物科技有限公司
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主營產(chǎn)品: 從事生物科技, 醫(yī)藥科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)咨詢, 技術(shù)服務(wù), 技術(shù)開發(fā), 技術(shù)轉(zhuǎn)讓, 商務(wù)咨詢(除經(jīng)紀(jì)), 電子商務(wù)(不得從事增值電信, 金融業(yè)務(wù)), 投資管理, 建設(shè)工程(憑許可資質(zhì)經(jīng)營), 化工原料及產(chǎn)品(除危險化學(xué)品, 監(jiān)控化學(xué)品, 煙花爆竹, 民用爆炸物品, 易制毒化學(xué)品), 實驗室設(shè)備, 測量器材, 酒店設(shè)備, 環(huán)保設(shè)備, 鐘表, 服裝鞋帽, 頗具箱包, 一類醫(yī)療器械, 電子產(chǎn)品, 陶瓷制品的銷售.
馬傳-染性貧-血-EIAV熒光PCR檢測試劑盒
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主營產(chǎn)品
從事生物科技, 醫(yī)藥科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)咨詢, 技術(shù)服務(wù), 技術(shù)開發(fā), 技術(shù)轉(zhuǎn)讓, 商務(wù)咨詢(除經(jīng)紀(jì)), 電子商務(wù)(不得從事增值電信, 金融業(yè)務(wù)), 投資管理, 建設(shè)工程(憑許可資質(zhì)經(jīng)營), 化工原料及產(chǎn)品(除危險化學(xué)品, 監(jiān)控化學(xué)品, 煙花爆竹, 民用爆炸物品, 易制毒化學(xué)品), 實驗室設(shè)備, 測量器材, 酒店設(shè)備, 環(huán)保設(shè)備, 鐘表, 服裝鞋帽, 頗具箱包, 一類醫(yī)療器械, 電子產(chǎn)品, 陶瓷制品的銷售.
- 基本信息
- 用途范圍:科研
- 產(chǎn)地:美國/中國
- 品牌:xuanya
- 規(guī)格:48T
- 貨號:XY-RD-D-1091
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:馬傳染性貧血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒
【包裝規(guī)格】48T/盒
Name :Equine infectious anemia (EIAV) nucleic acid detection kit (RT-PCR fluorescence probe method)
馬傳染性貧血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測動物腺、肝、脾、肺組織及人痰、血液等標(biāo)本中分離出的指標(biāo),用于指標(biāo)的定量檢測輔助診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒采對指標(biāo)基因設(shè)計特異性的引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)對指標(biāo)的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 | 規(guī) 格 |
核酸提取液 | 1.5mL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
反應(yīng)液 | 1.0mL×1 管 |
陽性質(zhì)控品 | 50μL×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【注意事項】
所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;
試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完全混勻并短暫離心;
反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服;
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。
馬傳染性貧血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒【使用方法】
樣品處理(樣本處理區(qū))
樣本前處理
組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;棉拭子取 100μL 進(jìn)行提取。
【標(biāo)本采集】
病死或撲殺豬,無菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品;生豬滅菌
棉拭子沾取氣管分泌物,放入無菌試管中
【標(biāo)本采集】
病死或撲殺豬,取分泌物、血液、*、扁桃體、*和淋巴結(jié)等
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本
運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
組織樣品:稱取組織樣品約 0.5g,置于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,勻漿后取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;
痰、尿液等液體樣品:取 100μL 于滅菌離心管中;
血液樣品:取抗凝血下層血細(xì)胞 50μL,加入 100μL 雙蒸水吹勻。
DNA 提取
對上述處理好的標(biāo)本加入 50μL 核酸提取液,100℃恒溫處理 10min,13,000
rpm 離心 5min,取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;
DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒
(離心柱提取法),請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量(樣本數(shù)為 N) | 20μL | 1μL |
將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21uL/管。
加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)
NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
結(jié)果分析判定
結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。
結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)明顯擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗,重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線者為陽性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。
檢測方法的局限性
樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果。
質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。
【參考文獻(xiàn)】
國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 1280-2003 國境口岸鼠疫檢驗規(guī)程[S].北京:科學(xué)出版社, 2003.
張志凱, 海榮, 蔡虹, 等. 鼠疫耶爾森菌的多重 PCR 檢測方法[J]. 中國媒介生物學(xué)及控制雜志, 2007.
吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶爾森菌核酸的測定-熒光PCR 方法[S].
馬傳染性貧血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】
患病動物:腺、肝、脾、肺組織、糞便、血液人:痰;尿液、血液
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【產(chǎn)品圖片】
【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱:上海烜雅生物科技有限公司
生產(chǎn)地址:金海公路3265號14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的馬傳染性貧血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒供應(yīng)質(zhì)量高,價格低,售后有保證。為您的實驗保駕護(hù)航。
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本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷。
馬傳-染性貧-血(EIAV)熒光PCR檢測試劑盒 產(chǎn)品:
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1151 肺炎鏈球菌(SP)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1152 雙歧桿菌(BD)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1153 百日咳桿菌(BP)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1154 產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1155 腸集聚性大腸桿菌(EAEC)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1156 腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1157 肉毒桿菌A型(CB-A)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1158 肉毒桿菌B型(CB-B)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1159 肉毒桿菌E型(CB-E)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
細(xì)菌類(人相關(guān)) XY-DT-D-1160 肉毒桿菌F型(CB-F)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)