【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：兔出血癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒

【包裝規(guī)格】48T/盒

Name ：Rabbit hemorrhagic disease virus type 2 (RHDV-2) nucleic acid detection kit (RT-PCR fluorescence probe method)

兔出血癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測動物腺、肝、脾、肺組織及人痰、血液等標本中分離出的指標，用于指標的定量檢測輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采對指標基因設(shè)計特異性的引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)對指標的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
核酸提取液	1.5mL×2 管
酶液	50μL×1 管
反應(yīng)液	1.0mL×1 管
陽性質(zhì)控品	50μL×1 管
陰性質(zhì)控品	250μL×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

兔出血癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒【使用方法】

樣品處理（樣本處理區(qū)）

樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；棉拭子取 100μL 進行提取。

【標本采集】

病死或撲殺豬，無菌采集肺病變部位或病變/非病變部位交界處的樣品；生豬滅菌

棉拭子沾取氣管分泌物，放入無菌試管中

【標本采集】

病死或撲殺豬，取分泌物、血液、*、扁桃體、*和淋巴結(jié)等

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本

運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。

組織樣品：稱取組織樣品約 0.5g，置于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，勻漿后取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；

痰、尿液等液體樣品：取 100μL 于滅菌離心管中；

血液樣品：取抗凝血下層血細胞 50μL，加入 100μL 雙蒸水吹勻。

DNA 提取

對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000

rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒

（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	反應(yīng)液	酶液
用量（樣本數(shù)為 N）	20μL	1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。

推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟	循環(huán)數(shù)	溫度	時間	收集熒光信號
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。

結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)明顯擴增曲線的樣本建議重復(fù)試驗，重復(fù)試驗結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

檢測方法的局限性

樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結(jié)果。

質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。

【參考文獻】

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 1280-2003 國境口岸鼠疫檢驗規(guī)程[S].北京:科學(xué)出版社, 2003.

張志凱, 海榮, 蔡虹, 等. 鼠疫耶爾森菌的多重 PCR 檢測方法[J]. 中國媒介生物學(xué)及控制雜志, 2007.

吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. DB22/T 2081-2014 鼠疫耶爾森菌核酸的測定-熒光PCR 方法[S].

兔出血癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

患病動物：腺、肝、脾、肺組織、糞便、血液人：痰；尿液、血液

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。

【產(chǎn)品圖片】

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的兔出血癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒質(zhì)量高，價格低，售后有保證。為您的實驗保駕護航。

請直接向我司客服索取說明書

本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

兔出血-癥病毒2型(RHDV-2)熒光PCR檢測試劑盒 產(chǎn)品：

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1191    寨卡（zika）病毒核-酸檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1192    黃熱病毒（YFV）核-酸檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1193    布尼亞病毒（BV）核-酸檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1194 登革熱病毒4型(DFV-IV)核-酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1195 登革熱病毒1型(DFV-I)核-酸檢測試劑盒(RT-PCR熒光探針法)

病毒及原生生物類    XY-EP-R-1196    病毒及原生生物類熒光PCR試劑盒

動物源性成分    XY-SG-D-1197    豬源性成分(Porcine)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

動物源性成分    XY-SG-D-1198    牛源性成分(Bovine)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

動物源性成分    XY-SG-D-1199    羊源性成分(Ovine)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

動物源性成分    XY-SG-D-1200    雞源性成分(Chicken)核-酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)