上海一研生物科技有限公司
主營產(chǎn)品: 生化試劑 ELISA試劑盒, 檢測(cè)試劑盒, 免疫組化試劑盒, 分子生物學(xué)試劑盒
鰓霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒
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上海市閔行區(qū)
主營產(chǎn)品
反應(yīng)五要素:
鰓霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
準(zhǔn)備物品:
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
鰓霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒 | Branchiomyce spp.PCR | 50T |
普通PCR反應(yīng)流程:
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
使用方法 :
1 實(shí)驗(yàn)所需器材與試劑
1.1 器材
1)PCR儀
2)PCR反應(yīng)管
3)電泳儀及水平電泳槽
4)高速離心機(jī)
5)微量移液器及移液器吸頭
1.2 試劑
1)瓊脂糖
2)EB(溴化乙錠)
3)去離子水或雙蒸水
注意事項(xiàng):
5.1使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本說明書全文。
5.2 操作時(shí)應(yīng)盡量少說話,因口腔中也含有支原體,可能引起樣品污染,而造成假陽性;整個(gè)檢測(cè)過程中,反應(yīng)體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴(kuò)增應(yīng)分區(qū)域進(jìn)行,以避免交叉污染。 5.3 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑盒組分中的試劑使用前應(yīng)充分融化并混勻(混勻時(shí)禁止激烈振蕩,只需要進(jìn)行上下倒置多次進(jìn)行混勻)。
5.4 反應(yīng)管中加好所有的試劑后,應(yīng)盡快上PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增,以免形成過多的二聚體。
5.5細(xì)胞培養(yǎng)物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會(huì)影響本品的檢測(cè)結(jié)果。如果用戶需要進(jìn)一步提高檢測(cè)靈敏度,建議細(xì)胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進(jìn)行培養(yǎng)2-3天后送樣檢測(cè)。
鹽酸肼屈嗪 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 50mg Yeast extract
鹽酸倍他司汀 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg Sodium carbonate anhydrous
鹽酸羥嗪 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg D-Fructose
β-欖香烯 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 0.1ml Riboflavin 5'-monophosphate sodium salt hydrate
格列齊特 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg EB, Ethidium bromide stock solution, 10 mg/ml
尼莫地平 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 50mg Green-DNA Dye,SYBR Green I
金諾芬 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 50mg D-Glucose
麥芽三糖 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg Imidazole
鹽酸丙卡特羅 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg L(+)-Arabinose
氨魯米特 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 50mg Formamide deionized
大豆油 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 200mg Paraffin oil, light fraction
對(duì)羥基苯甲酸甲酯 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 50mg Potassium acetate
泛酸鈉 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg Sodium acetate, anhydrate
格列喹酮 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg Agarose, low gelling temperature
格列吡嗪 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg Potassium phosphate, monobasic, anhydrous
核黃素磷酸鈉 現(xiàn)貨促銷 規(guī)格: 100mg 6-Benzylamino purine
鰓霉屬通用PCR檢測(cè)試劑盒人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)ponicidin 10mg
人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Gaultherin 5mg
人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Ilexgenin O 10mg
人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Ilexgenin A 5mg
人類似RIKEN cDNA 2010109K09 基因 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Helicid 25mg
人類似cDNA順序BC027382 Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Stigmasterol 5mg
人類似60S核糖體蛋白L21(LOC382344)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Farrerol 1mg
人類因子(RF)Elisa Kit(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)Liriope muscari baily saponins C 10mg