含量的測定

用于天門冬酰苯丙氨酸甲酯和乙酰磺胺酸含量的測定

滴定法

試劑和材料：苯甲酸:純度≥99%，乙醇，N,N-二甲基甲酰胺；

百里酚藍甲醇溶液:稱取0.30g百里酚藍于燒杯中,用甲醇溶解并稀釋至100mL；

四丁基氫氧化銨甲醇溶液:0.1mol/L。

四丁基氫氧化銨甲醇溶液(0.1mol/L)的標定:量取10mLN,N-二甲基甲酰胺于錐形瓶中,加入0.05mL百里酚藍甲醇溶液,用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定直至純藍色產(chǎn)生。立即加入0.2g(精確到0.001g)苯甲酸,攪拌,藍色消失,在氮氣保護下用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定直至純藍色產(chǎn)生。記錄第二次滴定所消耗的滴定液體積(V)。四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度c1,以摩爾每升(mol/L)計,按式(A.1)計算:

c1=m×1000/V×M1…………………………(A.1)

式中:

m-苯甲酸的質(zhì)量,單位為克(g);

1000———換算系數(shù);V-第二次滴定所消耗的四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

M1-苯甲酸的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M1(C7H6O2)=122.12]。

儀器和設備：pH計或電位滴定儀。

分析步驟：

稱取約0.1g~0.15g試樣,精確至0.001g。置于200mL燒杯中,用50mL乙醇溶解,在氮氣保護下,用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定,用pH計或電位滴定儀測定電位值,記錄第一突躍點和第二突躍點的滴定體積(V1,V2),同時量取50mL乙醇進行空白滴定,記錄體積(V0)。A.4.1.4結果計算乙?；前匪岬馁|(zhì)量分數(shù)w1,按式(A.2)計算:

w1=V1×c1×M2×100%/m1×1000…………………………(A.2)

式中:

V1-試樣中第一突躍點所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

c1-四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L);

M2-乙?；前匪岬哪栙|(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M2(C4H5NO4S)=163.15];

m1-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

天門冬酰苯丙氨酸甲酯的質(zhì)量分數(shù)w2,按式(A.3)計算:

w2=(V2-V1-V0)×c1×M3×100%/m1×1000…………………(A.3)

式中:

V2-試樣中第二突躍點所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

V1-試樣中第一突躍點所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

V0-空白所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

c1-四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L);

M3-天門冬酰苯丙氨酸甲酯的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M3(C14H18N2O5)=294.31];

m1-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

高效液相色譜法

試劑和材料:乙?；前匪?純度≥99.0%；

天門冬酰苯丙氨酸甲酯:純度≥99.0%；

磷酸鉀溶液:稱取5.6g磷酸鉀,加入820mL水,用磷酸調(diào)節(jié)pH=4.3,加入180mL甲醇,混勻,過0.45μm濾膜,脫氣備用。

甲醇溶液:1+9。

儀器和設備：高效液相色譜儀:配有紫外檢測器。

分析步驟

標準溶液制備

乙?；前匪針藴蕛淙芤?1000mg/L,精確稱取0.100g乙?；前匪針藴势?用甲醇溶液定容到100mL,混勻備用。

天門冬酰苯丙氨酸甲酯標準儲備溶液:1000mg/L,精確稱取0.100g天門冬酰苯丙氨酸甲酯標準品,用甲醇溶液定容至100mL,混勻備用。

乙?；前匪岷吞扉T冬酰苯丙氨酸甲酯混合標準溶液:100.0mg/L,分別吸取乙酰磺胺酸和天門冬酰苯丙氨酸甲酯標準儲備溶液10.0mL至100mL容量瓶,用甲醇溶液定容,混勻備用。

乙?；前匪岷吞扉T冬酰苯丙氨酸甲酯混合標準系列溶液:分別移取乙酰磺胺酸和天門冬酰苯丙氨酸甲酯標準混合標準溶液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL至10mL容量瓶,用甲醇溶液定容,混勻,即得10.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L、75.0mg/L、100.0mg/L混合標準系列溶液。

試樣溶液制備

稱取約0.1g試樣,精確至0.001g。置于100mL燒杯中,用少量甲醇溶液溶解。移入100mL容量瓶中,用甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻。精密量取1.0mL上述溶液,用甲醇溶液定容至10mL,供液相色譜儀測定,本試樣溶液需現(xiàn)配現(xiàn)測。

色譜參考條件

色譜柱:C18柱,250mm×4.6mm,5μm,或是同等分離效果的色譜柱。流動相:磷酸鉀溶液。檢測波長:210nm。柱溫:40℃。流速:2.0mL/minA.4.2.3.4測定分別吸取混合標準系列溶液和試樣溶液各10μL進行液相色譜測定,根據(jù)標準工作曲線計算試樣中乙?；前匪岷吞扉T冬酰苯丙氨酸甲酯的含量。

結果計算

試樣中乙?；前匪峄蛱扉T冬酰苯丙氨酸甲酯的質(zhì)量分數(shù)w3,按式(A.4)計算:

w3=c2×V3×f×100%/m2×1000×1000×100%…………………………(A.4)

式中:

c2-從標準工作曲線得到的乙?；前匪峄蛱扉T冬酰苯丙氨酸甲酯溶液的濃度,單位為毫克每升(mg/L);

V3-試樣溶液的定容體積,單位為毫升(mL);

f-試樣溶液的稀釋倍數(shù);m2-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

試驗結果以平行測定結果的算術平均值為準,結果保留三位有效數(shù)字。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值與算術平均值的比值不大于5.0%。