大鼠蛋白激酶B(PKB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

大鼠蛋白激酶B(PKB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

試劑的準(zhǔn)備
 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；
4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體50μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.  所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  所有孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

大鼠蛋白激酶B(PKB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

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