上海滬崢專業(yè)生產銷售新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒現(xiàn)貨，我公司供應的分子生物學試劑品類齊全，且具有優(yōu)勢價格，歡迎新老客戶咨詢認購。

產品詳細信息

名稱：新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒

規(guī)格： 20T/50T

品牌：上海滬崢

【用途】 用于鴨病毒性肝炎的檢測、診斷和流行病學調查。

【操作步驟】

1.RNA提取 

(1) 取疑似鴨病毒性肝炎的病料（*、*、淋巴結等）1~4g于無菌研缽，研磨并用PBS液（pH7.2~7.4）稀釋成1：4乳劑，分裝1.5ml滅菌EP管，反復凍融2~3次，8000r/min離心5分鐘。（病毒培養(yǎng)液，只需凍融1次即可8000r/min離心5分鐘）

（2）取200uL上清液（或標準品Ｔ），移入新的1.5mL滅菌EP管中，加入200uLSR-I，漩渦振蕩混合均勻，靜置5min。

（3）加75uL TU-1，漩渦振蕩混合均勻，10000r/min離心5 min。

（4）將上清轉移到新的2 ml離心管（試劑盒內提供）中，加入300 uL 異丙醇（1%冰乙酸），上下倒置6-8次，混合均勻。

（5）將步驟4中的混合液移入制備管中，并將制備管置于同一2 ml離心管，10000 r/min離心1min。

（6）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加500 uL SR-II，室溫靜置1min，10000 r/min離心1 min。

（7）棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，加700 uL SR-Ⅲ，10000 r/min離心1 min。

（8）將制備管置回到2 ml離心管中，10000 r/min離心1 min。

（9） 將制備管置于潔凈的1.5 ml離心管中（試劑盒內提供），在制備管膜中央加40 uL TU-2， 室溫靜置1 min。10000 r/min離心1 min洗脫。洗脫液即為模板，即用或-70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

 3 .PCR操作 

4.電泳

配制1%瓊脂糖凝膠，取PCR產物5uL混合1uL TU-8，加樣于凝膠孔中，同時在相鄰孔加3uLTU-7，在120v 電壓下，1×TAE液中電泳15分鐘，在紫外成像儀下觀察結果。

新型鴨病毒性肝炎一步法RT-PCR診斷試劑盒

【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。

2. 所有試劑在要求溫度下保存，-20℃保存試劑盡量減少反復凍融，使用后的試劑立即放回，避免在室溫擱置太久。

3. 盡量建立PCR試驗操作區(qū)，避免交叉污染。

4. 加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不精確、定時不準確造成無結果情況，不予負責。

5. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，要高壓滅菌，操作過程盡量不要用手接觸到管內壁，可用鑷子夾取。

6. 注意防止試劑污染，在有效期限前用完。

血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

    1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。

選擇抗凝的注意點：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

       ③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

       ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。