閑置回收液相色譜儀，液相色譜儀原理_液相色譜儀能測(cè)*?HPLC操作步驟[專題]

本文主題詞：液相色譜儀,液相色譜儀原理,液相色譜儀能干*,高效液相色譜儀操作步驟

一、高效液相色譜儀原理：

高效液相色譜法的原理是在原始的經(jīng)典色譜法基礎(chǔ)上面引用氣象色譜的理論，把原來(lái)的流動(dòng)性改變?yōu)?壓力可達(dá)到4.9′107Pa。色譜柱則是用特殊的方式用小顆粒裝填而成。造成的結(jié)果就是色譜柱的柱效遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于原始的經(jīng)典液相色譜。并且它柱子使用后還能具有高度靈敏度檢測(cè)器。能夠?qū)α鞒鰜?lái)的分析物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。

通俗來(lái)講就是：

多年前大學(xué)老師講的，至今認(rèn)為是最形象的對(duì)“色譜”的描述—講一群女孩子去逛街，街上店鋪林立，但是每個(gè)女孩子都有自己不同的喜好于是有的進(jìn)了這家，有的進(jìn)了那家，*大家越走越分散，所以有的先走出這條街，有的后走出來(lái)—女孩子指化合物，這條街是色譜柱。店鋪是固定相，推著化合物走得是流動(dòng)相，提供動(dòng)力的是泵，*站在街尾數(shù)人數(shù)認(rèn)人的是檢測(cè)器。認(rèn)人帶著照片啥的是標(biāo)準(zhǔn)品，認(rèn)出來(lái)走到倒數(shù)第二個(gè)的女孩就是你朝思暮想的那位。就可以定義或定量分析了。這就是高效液相色譜儀的原理

二、高效液相色譜儀能測(cè)*？

高效液相色譜儀是利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、分配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分離。高效液相色譜儀在食品分析、環(huán)境分析、生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和無(wú)機(jī)分析等領(lǐng)域得到廣泛使用。一般來(lái)說(shuō)，80%～85% 的有機(jī)物原則上可采用高效液相色譜儀分析。

一、在食品分析中的應(yīng)用：

1、食品營(yíng)養(yǎng)成分分析：

蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機(jī)酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸和蘋(píng)果酸等）、有機(jī)胺和礦物質(zhì)等分析。

2、食品添加劑分析：

甜味劑、防腐劑、著色劑（檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃和亮藍(lán)等）和抗氧化劑等分析。

3、食品污染物分析：霉菌毒素（黃曲霉毒素、黃桿菌毒素和大腸桿菌毒素等）、微量元素和多環(huán)芳烴等分析。

二、在環(huán)境分析中的應(yīng)用：

多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）和農(nóng)藥殘留（氨基甲酸脂類，反相色譜）等分析。

三、在生命科學(xué)中的應(yīng)用：

1、低分子量物質(zhì)：氨基酸、有機(jī)酸、有機(jī)胺、類固醇、卟啉、糖類和維生素等分析。

2、高分子量物質(zhì)：多肽、核糖核酸、酶（胰島素、激素、細(xì)胞色素和干擾素等）和蛋白質(zhì)等分析。

四、在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用：1、合成藥物：抗生素、抗憂郁藥物和黃胺類藥等分析。2、天然藥物生物堿：吲哚堿、顛茄堿和強(qiáng)心甙等分析。五、在無(wú)機(jī)分析中的應(yīng)用：陽(yáng)、陰離子等分析。這就是高效液相色譜儀能測(cè)*？

三、高效液相色譜儀操作步驟：

1、開(kāi)機(jī)設(shè)定參數(shù)（檢測(cè)波長(zhǎng)、流速），更換所需流動(dòng)相，檢查色譜柱是否正確。

2、排液置換管路中流動(dòng)相，沖洗進(jìn)樣閥，洗好進(jìn)樣針。

3、沖洗色譜柱進(jìn)行平衡，其間可提前進(jìn)行樣品的處理，樣品信息的注冊(cè)。

4、平衡好以后進(jìn)空白試驗(yàn)，排除系統(tǒng)污染。

5、柱子穩(wěn)定好以后進(jìn)樣，等待運(yùn)行結(jié)束（其間清洗進(jìn)樣針），積分計(jì)算，出具報(bào)告。

詳細(xì)操作步驟如下：

1、 開(kāi)機(jī)操作：

（1）、打開(kāi)電源，用Harb相連接時(shí)，注意Harb電源，打開(kāi)計(jì)算機(jī)，打開(kāi)Bootp Server（一般啟動(dòng)時(shí)已打開(kāi)）； 

（2）、自上而下打開(kāi)個(gè)組件電源，Bootp Server里顯示有信號(hào)時(shí)（有六行字符），打開(kāi)工作站（先打開(kāi)On line）； 

（3）、打開(kāi)沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開(kāi)關(guān)（需用針捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量為準(zhǔn)； 

（4）、注意各流動(dòng)相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于*限會(huì)自動(dòng)停泵，注意洗泵溶液的體積，及時(shí)加液； 

（5）、使用過(guò)程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時(shí)正確處理各種突發(fā)事件。 

2、 先以所用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)一定時(shí)間（如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)相），正式進(jìn)樣分析前30min 左右開(kāi)啟D燈或W燈，以延長(zhǎng)燈的使用壽命； 

3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果； 

4、 使用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液*的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡； 

5、 溶劑瓶中的沙芯過(guò)濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過(guò)濾頭變臟或長(zhǎng)菌時(shí)，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌； 

6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個(gè)管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過(guò)程中關(guān)閉D燈、W燈； 

7、 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)閉泵、檢測(cè)器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機(jī)，*自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開(kāi)關(guān)； 

8、 使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度，不要擅自拆卸儀器。

流動(dòng)相： 

1、 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍； 

2、 水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過(guò)2天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)； 

3、 使用雙泵時(shí)，A、B、C、D四相中，若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相，則A、D（進(jìn)液口位于混合器下方）放置含鹽流動(dòng)相，B、C（進(jìn)液口位于混合器上方）放置不含鹽流動(dòng)相；

A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶，用于存放水相流動(dòng)相。

樣品： 

1、 采用過(guò)濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒； 

2、 用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng)相小）的溶劑制備樣品溶液，盡量用流動(dòng)相制備樣品液；

手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的3～5倍；

色譜柱： 

1、 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書(shū)，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等； 

2、 使用符合要求的流動(dòng)相； 

3、 使用保護(hù)柱； 

4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇沖洗。 

5、 色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存； 

6、 不要高壓沖洗柱子； 

7、 不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；