測定意義:
磷的存在形態(tài)包括無機(jī)磷與有機(jī)磷。無機(jī)磷主要指磷酸根,參與生物體內(nèi)多種代謝,包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機(jī)磷含量即可了解作物對磷的利用率,進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。
測定原理:
總磷經(jīng)消化后,轉(zhuǎn)化成無機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測定無機(jī)磷含量的經(jīng)典方法,一定條件下,鉬藍(lán)與磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物質(zhì),通過測定660nm光吸收,即可計算無機(jī)磷含 量,進(jìn)而可計算出組織中總磷含量。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、蒸餾水和濃-硫-酸。
有機(jī)磷消化:
取帶蓋試管,進(jìn)入精確稱取50℃烘干至恒重的約0.1 g組織,加濃-硫-酸1.0 mL,蓋緊(防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后,加試劑一200μL,充分混勻,蓋緊后繼續(xù)沸水浴,直到溶液呈透明狀,取出室溫冷卻后,加蒸餾水8.8 mL,充分混勻;室溫,8000g,離心10min,取上清液待測。
測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 打開水浴鍋,調(diào)節(jié)溫度到40℃。
3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,依次加入50μL標(biāo)準(zhǔn)液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測定管:取EP管,依次加入50μL上清液,450μL蒸餾水,500μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min,室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。