輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒_50管/24樣(之禮生物提供)
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品牌 之禮生物
規(guī)格 50管/24樣
測(cè)定方法 分光光度法
用途 僅供科研使用
產(chǎn)品包裝 液體盒裝
最小起訂 1盒起訂
供應(yīng)商 上海之禮生物科技有限公司
保持期 6個(gè)月
保存條件 低溫、避光保存
供貨數(shù)量 609
商品介紹
?科研提供 輔酶ⅡNADP(H)含量檢測(cè)試劑盒_50管/24樣

測(cè)定意義:
輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一,而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理:
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為甲瓚,570nm下檢測(cè)吸光值,從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,從而檢測(cè)NADP+含量。

所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

NADP+和NADPH的提?。?/span>
1 血清(漿)中NADP+和NADPH的提取
NADP+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取約0.1mL血清(漿),加入1mL酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
NADPH的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取約0.1mL血清(漿),加入1mL堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2組織中NADP+和NADPH的提?。?/span>
NADP+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取約0.1g組織,加入1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
NADPH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議取約0.1g組織,加入1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3 細(xì)胞或細(xì)菌中NADP+和NADPH的提取:
NADP+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
NADPH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿性提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μL上清液,加入500μL酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
注    意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。


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公司名稱 上海之禮生物科技有限公司
聯(lián)系賣家 夏力 (QQ:2881498548)
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