碘化丙啶PI溶液（1mg/ml）

貨號：ZK-PL4212

品牌：子科生物ZIKER

描述：

碘化丙啶 別名:皮薩草, 英文名稱: propidium iodide，CAS號: 25535-16-4, 分子式: C27H34I2N4, 分子量: 668.40。 碘化丙啶（PI）是一種溴化乙啶的類似物，可以嵌合到雙鏈DNA和RNA的堿基對中釋放紅色熒光的熒光染料，無堿基特異性?？蓪?/span>DNA染色的細(xì)胞核染色試劑。碘化丙啶不能通過活細(xì)胞mo，即正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞在不固定的情況下對PI拒染；而壞死細(xì)胞由于失去膜的完整性，PI能穿過破損的細(xì)胞mo而對核染色，可鑒別死細(xì)胞。PI經(jīng)常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時對活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。碘化丙啶與雙鏈DNA結(jié)合后產(chǎn)生熒光的強(qiáng)度與雙鏈DNA的含量成正比，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的分析。碘化丙啶染色后，假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1，含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1～2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化，導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細(xì)胞峰。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535 nm和615 nm。本產(chǎn)品為PI水溶液，濃度為1mg/ml。使用時根據(jù)實(shí)驗不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。

適用范圍：

本品常用于流式細(xì)胞儀分析和顯微鏡觀察，檢測細(xì)胞凋亡或細(xì)胞壞死，以及細(xì)胞周期的分析。

儲存：

-20℃ 避光保存6個月；4℃保存1個月。

組成：

碘化丙啶染色液（1mg/ml） 1ml， 5ml 稀釋液 50ml,

染色步驟：

1. 培養(yǎng)細(xì)胞染色

（1）染色前取適量PI水溶液加到稀釋液中，制備成PI工作液（為20～50μg/ml）。

（2）將1/10培養(yǎng)基體積的PI溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)細(xì)胞10-20分鐘。

（3）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次，熒光顯微鏡觀察。

2. 固定細(xì)胞染色

（1） 單層細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本或懸浮細(xì)胞經(jīng)4℃預(yù)冷70％乙醇或4% 多聚甲醛固定1小時。

（2） 用0.01mol的PBS（pH 7.4）沖洗。

（3） 瀝干后加入PI工作液，室溫孵育15分鐘；細(xì)胞含量范圍一般為0.1～1×106之間。

（4） 用于流式細(xì)胞儀檢測；或沖洗后封片, 熒光顯微鏡下觀察，激發(fā)波長為535nm，發(fā)射波長為615nm。

染色結(jié)果：

熒光顯微鏡觀察，DNA呈紅色熒光.

說明：

1.  熒光染料都存在淬滅的問題，建議工作液用前配制；染色后盡快檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

2. 在獲得細(xì)胞沉淀的離心過程中，對于特殊細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)提高離心力或延長離心時間。

3.  如果檢測組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡，必須把組織制備成單細(xì)胞懸液，才可以進(jìn)行檢測。