植物總蛋白提取試劑/Plant Total Protein Extraction Kit

貨號(hào)：ZK-PL3506

描述：

植物組織成分復(fù)雜含有較多的酚類(lèi)物質(zhì)、多糖、色素、次生代謝產(chǎn)物，這使得植物蛋白質(zhì)的分離提取變得困難。本試劑適用于多種植物根、莖、葉及果實(shí)等的新鮮或凍存組織，能夠快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分，有效去除組織中所含的多糖、脂質(zhì)、此生代謝產(chǎn)物等干擾蛋白研究的成分，同時(shí)能夠使提取的蛋白質(zhì)處于最佳的活性狀態(tài)和檢測(cè)狀態(tài)，適用于酶學(xué)活性測(cè)定，單向、雙向蛋白電泳、Western Blot和免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)。

適用范圍：

提取多種植物組織和細(xì)胞如蘋(píng)果、花生、土豆、煙葉、菠菜、梅花等。

儲(chǔ)存：

4oC避光保存，12個(gè)月有效

規(guī)格：

50ml  100ml

操作步驟；

1. 組織勻漿，必須充分勻漿，這一步非常關(guān)鍵。

（1） 凍存組織勻漿：預(yù)先將研缽至于-20oC或-70oC冰箱內(nèi)預(yù)冷。取液氮凍存的植物組織，放入冰凍的研缽內(nèi)研磨成粉末，注意使樣本處于冰凍狀態(tài)，如樣本顏色加深或變黑通常表明已經(jīng)融化。將研磨好的組織轉(zhuǎn)移到新管，按每200mg植物組織加0.5mL比例加入提取試劑，混勻后冰上放置20分鐘，期間可數(shù)次顛倒混勻，使蛋白溶解。

（2） 新鮮組織勻漿：取新鮮組織放入研缽中，按每200mg植物組織加0.5mL比例加入提取試劑，充分研磨至勻漿液中看不到大的塊狀或者片狀組織，保證樣本完全研磨破碎。轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，冰上放置20分鐘。

2. 離心：12000g離心15分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，直接使用或-70oC儲(chǔ)存。

3. 后續(xù)處理：

（1） 如果進(jìn)行酶學(xué)測(cè)定，直接取蛋白上清液加入反應(yīng)。

（2） 沉淀蛋白；首先估計(jì)制備的蛋白上清液體積。方法一：加1/3體積30%三氯醋酸水溶液；方法二：加入6-10倍體積的1:1混合的丙酮/乙醇,-20oC沉淀1小時(shí)或過(guò)夜。4oC，5000g離心10分鐘，棄上清，空氣略干沉淀，用適量的1*SDS上樣緩沖液溶解沉淀，95 oC變性5分鐘，上樣電泳。適于進(jìn)行SDS-PAGE、Western Blot、雙向電泳等。

（3） 直接電泳：需加入4*SDS上樣緩沖液。上清如有少量色素一般不會(huì)影響蛋白電泳。

（4） 免疫共沉淀：用蒸餾水等比例稀釋提取的蛋白上清，進(jìn)行免疫共沉淀。

（5） 蛋白定量：用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行定量（產(chǎn)品貨號(hào)P1511）.

常見(jiàn)問(wèn)題集解決方法：

1. 提取的蛋白量少：1）組織蛋白含量較少，如水果等，可增加組織量；2）組織勻漿不充分，如纖維較多的組織破碎較困難，應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)研磨時(shí)間；3）組織過(guò)老或水分丟失致使其干燥，應(yīng)盡量選用新鮮較嫩的組織；4）甲醇或丙酮沉淀后蛋白溶解不充分，應(yīng)延長(zhǎng)溶解時(shí)間或使用較強(qiáng)的蛋白溶解劑。

2. 蛋白質(zhì)量不佳：1）提取的蛋白有多酚或色素等雜質(zhì)殘留，可重復(fù)用丙酮或甲醇沉淀；2）蛋白質(zhì)降解，操作個(gè)步驟應(yīng)迅速，在冰上進(jìn)行，用戶也可以自行選擇加入蛋白酶抑制劑。