上海極威生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 生物試劑
極威活體組織線粒體內(nèi)膜功能(膜電位)熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)優(yōu)勢(shì)供應(yīng)
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G&VS10013.4 v.A
活體組織線粒體內(nèi)膜功能(膜電位)熒光測(cè)定試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
主要用途
活體組織線粒體內(nèi)膜功能(膜電位)熒光測(cè)定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽(yáng)離子熒光羰花青染料結(jié)合到線粒體基質(zhì),其熒光的增強(qiáng)或減弱說明線粒體膜電位的變化,即內(nèi)膜電負(fù)性的增高或降低,來分析線粒體內(nèi)膜功能完整性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種活體組織線粒體的功能檢測(cè)。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、衰老等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,活體檢測(cè),操作簡(jiǎn)易,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
陽(yáng)離子熒光羰花青染色劑JC-1(5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)是一種對(duì)膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進(jìn)入線粒體,分布和結(jié)合在線粒體基質(zhì)上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高,JC-1形成聚集體,而濃度高,熒光顯色為紅色或桔紅色;反之,則為綠色。熒光減弱表明線粒體內(nèi)膜功能受到損害。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 毫升
染色液(Reagent B) 微升
稀釋液(Reagent C) 毫升
裂解液(Reagent D) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存清理液(Reagent A)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里;染色液(Reagent B)避免光照;有效保證6月
用戶自備
24孔細(xì)胞培養(yǎng)板:用于活體組織線粒體染色的容器
DOUNCE勻漿器:用于制備組織裂解懸液
微型臺(tái)式離心機(jī):用于組織成分的制備
培養(yǎng)箱:用于染色孵育
96孔板或比色皿:用于熒光定量分析的容器
熒光顯微鏡:用于活體組織細(xì)胞線粒體熒光定性分析
熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于活體組織細(xì)胞線粒體熒光定量分析
實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(Reagent B)置入冰槽里融化,稀釋液(Reagent C)放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(Reagent B)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升稀釋液(Reagent C),混勻后,在冰槽里靜置,并標(biāo)記為染色工作液,放在暗室里。然后進(jìn)行下列操作。
一、 直接法-熒光顯微鏡檢測(cè)
1. 準(zhǔn)備1個(gè)24孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2. 放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本(注意:建議組織大小為0.5厘米;如果過大,最好刀切處理一下)
3. 將組織壓平
4. 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),清洗組織樣本
5. 小心抽去清理液
6. 小心加入xx微升染色工作液,浸沒整個(gè)組織
7. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱,孵育20分鐘,避免光照
8. 小心抽去染色液
9. 小心加入xx 37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),清洗組織樣本
10. 小心抽去清理液
11. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
12. 后續(xù)切片(100微米厚)
13. 置于載波片上
14. 蓋上蓋玻片,用手指輕輕壓平
15. 即刻在熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下進(jìn)行觀察(單濾波或雙濾波),通過電腦軟件分析熒光強(qiáng)度:
觀察紅色熒光:
觀察綠色熒光:
二、 間接法-熒光分光光度儀測(cè)定
1. 準(zhǔn)備1個(gè)24孔細(xì)胞培養(yǎng)板
2. 放進(jìn)新鮮切除的動(dòng)物組織樣本(注意:建議組織大小為0.5厘米;如果過大,最好刀切處理一下)
3. 將組織壓平
4. 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),清洗組織樣本
5. 小心抽去清理液
6. 小心加入xx微升染色工作液,浸沒整個(gè)組織
7. 放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱,孵育20分鐘,避免光照
8. 小心抽去染色液
9. 小心加入xx毫升37℃預(yù)熱的清理液(Reagent A),清洗組織樣本
10. 小心抽去清理液
11. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至10二次
12. 小心加xx毫升裂解液(Reagent D)
13. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
14. 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
15. 在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)
16. 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
17. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g
18. 小心移出100微升上清液到黑色96孔板里或100微升比色皿里
19. 即刻進(jìn)行熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀測(cè)定(單一測(cè)定或雙重測(cè)定):
訂購(gòu)信息
編號(hào) 名稱 規(guī)格
G&VS10013.4 活體組織線粒體內(nèi)膜功能(膜電位)熒光測(cè)定試劑盒 10次
G&VS10013.4A 清理液(Reagent A) 500毫升
G&VS10013.4B 染色液(Reagent B) 500微升
G&VS10013.4C 稀釋液(Reagent C) 50毫升
G&VS10013.4D 清理液(Reagent D) 100毫升
產(chǎn)品編號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
G&VS10006.1 | 動(dòng)物細(xì)胞/組織線粒體粗提分離試劑盒 | 10/50次 |
G&VS10006.2 | 動(dòng)物細(xì)胞/組織活性線粒體分離試劑盒 | 10/50次 |
G&VS10006.3 | 動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒 | 10次 |
G&VS10013.1 | 純化線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 | 100次 |
G&VS10013.2 | 活體細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10013.3 | 完全線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10013.4 | 活體組織線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 | 10次 |
G&VS10013.5 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.1 | 線粒體外膜功能檢測(cè)試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.2 | 純化線粒體細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.3 | 細(xì)胞/組織懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.4 | 純化細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.5 | 真菌/酵母細(xì)胞懸液細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10014.6 | 植物細(xì)胞色素C氧化酶活性測(cè)定試劑盒 | 20次 |
G&VS10015 | 線粒體功能詹納斯綠B(JGB)染色試劑盒 | 20次 |
G&VS10019.1 | 活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100/200次 |
G&VS10019.2 | 植物組織線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 20次 |
G&VS10019.3 | 真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100次 |
G&VS10019.4 | 純化線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒 | 100次 |