G&VS10010.3 v.A

冰凍切片組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

冰凍切片組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑是一種旨在以X-Gal為底物，通過切片組織內(nèi)表達的外源性細菌β-半乳糖苷酶的催化生成深藍色的沉積產(chǎn)物，從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到藍色表達的細胞或組織，藉此建立一種簡單的目測顏色來識別報告基因陽性細胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和其它分子生物學(xué)研究。其適用于轉(zhuǎn)基因后的人體和動物的冰凍組織切片。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，著色敏感。

技術(shù)背景

大腸桿菌的標志基因Lac Z編碼β-半乳糖苷酶（?-galactosidase；?-gal），在其催化作用下，半乳糖可從乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常穩(wěn)定，對蛋白水解降解作用抗性強，且容易測試。因此β-半乳糖苷酶成為目前最常用的報告基因，以評價載體轉(zhuǎn)染的效果。X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl- ?-D-Galactopyranoside）是生物化學(xué)中常用的一種有機物，β- 半乳糖苷酶可以將X-Gal轉(zhuǎn)化為藍色的產(chǎn)物，由此用它作為生色底物，來建立一種簡單的目測顏色來確定細胞β-半乳糖苷酶的活性，從而通過光學(xué)顯微鏡鑒別轉(zhuǎn)染細胞報告基因的存在與否和強弱表現(xiàn)。 

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）     毫升

固定液（Reagent B）   毫升

稀釋液（Reagent C）   毫升

染色液（Reagent D）   毫升

產(chǎn)品說明書   1份

保存方式

保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀釋液（Reagent C）和染色液（Reagent D），用鋁箔封裹，避免光照；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于配制染色工作液

光學(xué)顯微鏡：觀察染色后的組織細胞

實驗步驟

實驗開始前，將試劑盒里的染色液（Reagent D）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液（Reagent C）到15毫升錐形離心管，加入xx微升染色液（Reagent D），混勻后，置入37℃恒溫水槽里預(yù)熱，標記為染色工作液。然后進行下列操作：

1． 準備10片待測的厚為10微米的冰凍切片

2． 小心加上xx微升預(yù)冷的固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面

3． 室溫下孵育10分鐘

4． 小心移去切片上的固著液（Reagent B） 

5． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面

6． 室溫下，孵育5分鐘

7． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 

8． 重復(fù)實驗步驟5至7二次

9． 小心加上xx微升預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個切片表面

10． 在37℃濕潤的無CO2培養(yǎng)箱里，孵育16至24小時，保持濕潤，避免干燥

11． 小心移去切片上的染色工作液 

12． 小心加上xx微升清理液（Reagent A），鋪滿整個切片表面

13． 小心移去切片上的清理液（Reagent A） 

14． （選擇步驟）核固紅復(fù)染：細胞核呈現(xiàn)粉紅色（建議使用核固紅復(fù)染試劑盒――G&VS40011）

15． 放上蓋玻片或封片

16． 即刻在光學(xué)顯微鏡下觀察和計數(shù)：表達β- 半乳糖苷酶活性的地方，呈現(xiàn)藍色

質(zhì)量標準

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色敏感

使用承諾

極威生物秉著“信譽至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后，應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴格的質(zhì)量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯(lián)系，并將該產(chǎn)品退回，經(jīng)檢驗確系產(chǎn)品質(zhì)量所致，本公司負責更換產(chǎn)品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

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編號 名稱 規(guī)格

G&VS10010.3 冰凍切片組織β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒 50次

G&VS10010.3A 清理液（Reagent A）   毫升

G&VS10010.3B 固定液（Reagent B） 毫升

G&VS10010.3C 稀釋液（Reagent C） 毫升

G&VS10010.3D 染色液（Reagent D） 毫升

G&VS40011 核固紅復(fù)染試劑盒 50次

試劑盒訂購信息

上海極威生物科技有限公司（Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.）成立于上海，是一家專業(yè)從事“產(chǎn)品研發(fā)、市場銷售、技術(shù)服務(wù)”為一體的高科技生物技術(shù)公司。公司主營產(chǎn)品有elisa試劑盒，小鼠elisa試劑盒，大鼠elisa試劑盒，植物elisa試劑盒，食品安全系列試劑盒，糖尿病系列試劑盒，細胞因子系列試劑盒，血漿相關(guān)指標elisa試劑盒，一步法試劑盒，生化試劑盒，標準品，細胞株，生化試劑，技術(shù)服務(wù)（生化測試、液相氣相檢測、ICP-MS測試），在科學(xué)研究和醫(yī)療檢測領(lǐng)域享有良好的聲譽，經(jīng)過多年的努力發(fā)展已成為專業(yè)供應(yīng)各類生物科研用品的公司，長期專注于生物領(lǐng)域，旗下產(chǎn)品種類眾多。